barvení TUNEL a TUNEL assay

Gao Y et al. použitý HRP-DAB TUNEL assay kit ab206386 analyzovat tkáňové řezy z myších vaječníků. a. sekce léčená Dnázou I jako pozitivní kontrola. b. negativní kontrola bez enzymu TdT. C a f. reprezentativní experimentální obrazy. Jádra obarvená tunelovým testem jsou Hnědá. Úseky byly protiběžné Metylovou zelení.

Výhody a nevýhody TUNEL metod barvení

TUNEL barvení / TUNEL assay protokoly, které používají nukleotidů přímo označeny fluorescenční barviva jsou rychlejší než nepřímé metody, které používají buď protilátka nebo streptavidin-biotin komplex, protože vyžadují méně barvení kroky.

metody, které se spoléhají na nukleotidy značené biotinem, mohou těžit z amplifikace komplexu streptavidin-biotin. Vyžadují další blokovací kroky k neutralizaci endogenního biotinu a snížení barvení pozadí, i když jsou společné všem výzkumníkům, kteří provozují tradiční chromogenní imunohistochemii.

metody založené na BrdU mohou také produkovat jasnější signál, protože BrdU je obvykle snadněji začleněn enzymem TdT.

relativní popularita TUNEL barvení/TUNEL assay metody

průzkum 50 výzkumných prací publikovaných v roce 2017 obsahující výraz „TUNEL Assay“ nebo „TUNEL Barvení“, ukázal, že:

– 50% dokumentů používá dUTP přímo konjugovaný s FITC

– 15% používá biotin-dUTP a streptavidin-HRP

– 15% použit FITC-dUTP a anti-FITC protilátkou konjugovaný s HRP

– 12% používá digoxygenin-dUTP, a anti-digoxygenin protilátky konjugované buď fluorescenční barvivo nebo HRP

– 8% používá Br-dUTP a anti-BrdU protilátkou konjugovanou s fluorescenční barvivo

Všechny papíry dotázaných používá TUNEL assay v zobrazování, spíše než průtoková cytometrie. Tam, kde byl použit HRP, byl přidán substrát DAB, aby se vytvořila hnědá skvrna. Více než 90% výzkumných prací používalo soupravu pro barvení tunelů.