cíl

naučit se techniku latexové aglutinace.

latexová aglutinace je pozorována, když je vzorek obsahující specifický antigen (nebo protilátku) smíchán s protilátkou (nebo antigenem), která je potažena na povrchu latexových částic.

Latexové aglutinační testy byly použity v klinických laboratořích pro detekci infekčních onemocnění a v roce 1956 Zpěvák a Schovat jako první popsal Revmatoidní Faktor Test, test založený na latexové aglutinace. U revmatoidní artritidy (RA), IgG protilátky produkované lymfocyty v synoviální kloub reagovat s IgM protilátky (RF, revmatoidní faktor) generovat imunitní komplexy, které mohou aktivovat komplement a způsobit destrukci tkáně. RA má diagnostický význam.

od té doby byly vyvinuty a prodávány mnoha společnostmi po celém světě testy na detekci mikrobiálních a virových infekcí, autoimunitních onemocnění, hormonů, léků a sérových proteinů. Princip se používá pro diagnostiku mnoha infekcí, jako je hepatitida B, H. influenzae, N. meningitidis atd.. Všechny metody detekce nebo kvantifikace antigenu nebo protilátky využívají skutečnosti, že reagují na vytvoření komplexu. Při optimální koncentraci antigen-protilátka se tento komplex vysráží. Pokud je však antigen v přírodě částic, je pozorována aglutinace komplexu antigen-protilátka.

Aglutinace Reakce

reakce mezi částic antigenu a protilátky za následek viditelné shlukování tzv. aglutinace. Protilátky, které vyvolávají takové reakce, jsou známé jako aglutininy. Princip Aglutinačních reakcí je podobný srážecím reakcím, závisí na zesítění polyvalentních antigenů. Když je antigen erytrocyt, nazývá se hemaglutinace.Teoreticky všechny protilátky mohou aglutinovat antigeny částic, ale IgM, díky své vysoké specificitě je zvláště dobrý aglutinin.

neexistuje žádná aglutinace, pokud je koncentrace protilátky vysoká (nižší ředění) a poté se vzorek zředí, dochází k aglutinaci. Prozone efekt je definován jako neviditelnost aglutinace při vysokých koncentracích protilátek. Je to způsobeno tím, že nadbytek protilátek tvoří velmi malé komplexy, které se neshlukují a vytvářejí viditelnou aglutinaci.

kvalitativní aglutinační test

aglutinační testy mohou být použity kvalitativním způsobem pro stanovení přítomnosti antigenu nebo protilátky. Protilátka se smísí s antigenem částic a pozitivní test je indikován aglutinací antigenu částic.

například pro stanovení krevního typu pacienta mohou být červené krvinky osoby smíchány s protilátkou proti antigenu krevní skupiny. Dalším příkladem je, že do testu přítomnost protilátek u pacienta, vzorku séra pacienta se smíchá s červených krvinek (RBC) známé krevní skupina.

kvantitativní aglutinační test

k měření hladiny protilátek proti antigenům částic lze široce použít aglutinační test. Pro tento test lze provést sériová ředění vzorku a je testován na protilátku. Pak může být přidáno pevné množství antigenu částic nebo bakterií nebo červených krvinek. Stanovte maximální ředění, které tvoří aglutinaci, a toto maximální ředění, které dává pozorovatelnou aglutinaci, se nazývá titr. Výsledky jsou zobrazeny jako reciproční maximální ředění, které tvoří viditelnou aglutinaci.

Pasivní Hemaglutinace

citlivost a jednoduchost aglutinace reakce může být prodloužena na rozpustné antigeny technikou pasivní hemu aglutinace. V této technice, antigen coated červené krvinky jsou připraveny smícháním rozpustného antigenu s červených krvinek, které byly ošetřeny s kyselinou tříslovou nebo chromium chlorid, z nichž oba podporují adsorpci antigen na povrchu buňky. Je však možné potahovat erytrocyty rozpustným antigenem (např.. virový antigen, polysacharid nebo hapten) a použijte potažené červené krvinky v aglutinačním testu na protilátku proti rozpustnému antigenu.

Sériově ředěné sérum obsahující protilátky je načten do každé jamky mikrotitrační destička, po které antigenem potažené červené krvinky je aplikována na každého stejně. Charakteristický vzor slepených červených krvinek na studny se používají jako nástroj pro analýzou aglutinace reakce. Pokud je antigen částicový, může antigen reagovat s protilátkou v séru a má za následek shlukování antigenu, což vykazuje pozitivní výsledek.

během posledních několika let došlo k posunu od červených krvinek k syntetickým částicím, jako jsou latexové korálky. Přípravek může být použit okamžitě nebo skladován pro pozdější použití. Použití syntetických korálků nabízí výhody konzistence, jednotnosti a stability. Kromě toho lze aglutinační reakce využívající syntetické kuličky rychle číst, často během 3 až 5 minut po smíchání kuliček se zkušebním vzorkem. Ať už na základě červených krvinek nebo více pohodlné a univerzální syntetické korálky, aglutinace reakce jsou jednoduché na provedení, nevyžadují drahé vybavení, a detekovat malé množství protilátek ( koncentrace tak nízké, jak nanogramů na mililitr).

prvním krokem testu je propojení latexové částice, které molekuly protilátek, které se specificky vážou na antigenní determinanty na povrchu částic. Tam je tvorba velkých svazech přes tyto křížové odkazy a tyto velké svazy sediment snadno vzhledem k velké velikosti shluků a jsou viditelné pouhým okem během několika minut. Stupeň aglutinace lze určit vynesením koncentrace aggutinantu, která dává křivku ve tvaru zvonu. Komplexy antigen-protilátka mohou být zvětšeny pomocí latexových částic. Mnoho testů latexové aglutinace se provádí ručně a detekuje vizuálním pozorováním. K určení aglutinace musí obsahovat asi 100 shluků a tyto shluky musí mít velikost asi 50 mikrometrů, aby je bylo možné vidět okem.

Inhibice Aglutinace Reakce

Pokud protilátka je inkubovány s antigenem před smícháním s latexovou, aglutinační je inhibována; je to proto, zdarma protilátky nejsou k dispozici pro aglutinace. Při inhibici aglutinace je nepřítomnost aglutinace diagnostickým antigenem, poskytuje vysoce citlivý test pro malé množství antigenu. Například domácí těhotenské soupravy obsahují latexové částice potažené lidským chorionickým gonadotropinem (HCG hormon) a protilátku proti HCG. Moč těhotné ženy obsahuje HCG, který je vylučován vyvíjející se placentou po oplodnění. Přidání moči obsahující HCG inhibuje aglutinaci latexových částic, když je přidána protilátka proti HCG; a proto je těhotenství indikováno nepřítomností aglutinace.

Latexové Částice

Emulzní polymerace je postup, který je použit pro přípravu latexové částice. Nejprve se styren smísí s roztokem povrchově aktivní látky (dodecylsulfátu sodného), tvoří miliardy emulgovaných micel, které mají jednotný průměr. Poté se k němu přidá malé množství persíranu draselného, což je ve vodě rozpustný polymerační iniciátor. Po dokončení procesu polymerace jsou polystyrenové řetězce uspořádány do micel. Uhlovodíková část polystyrenového řetězce je připojena ke středu a koncový síranový iont k povrchu koulí, který je vystaven vodní fázi. Ostatní uhlovodíky a jejich deriváty jsou také používány pro výrobu jednotných latexové částice, některé příklady jsou stryrene-dlvinylbenzene, polymetylmetakrylátu, vinyl-styren toluen, polyvinyl toluen atd.

proces výroby latexových částic se vyvinul z výroby syntetického kaučuku a také emulze má mléčný vzhled, je mu dán termín latex .Požadovaný průměr latexové částice může být vyroben modifikací procesu přípravy, uhlovodíků, povrchově aktivních látek a iniciátoru. Velikost částic latexů se obvykle pohybuje mezi 0,05 µm až 2 µm. Vzhledem k přítomnosti síranových a sulfonátových iontů na povrchu částice, která poskytuje částice inherentní negativní povrchový náboj.

latexové částice mohou být funkcionalizovaných a povrchovou úpravou pro usnadnění závazné stability a zvýšení analytu přílohu. Funkční ošetření, jako je amidace, aminace, karboxylace, hydroxylace a dokonce magnetizace, se používá ke zvýšení vlastností latexových částic. Také různé barvy latexových částic jsou komerčně dostupné, které usnadňují vizuální čtení.

latexový aglutinační test je klinická metoda k detekci určitých antigenů nebo protilátek v různých tělesných tekutinách, jako je krev, sliny, moč nebo mozkomíšní mok. Na zkušební vzorek je odeslán do laboratoře a tam, kde je smíchán s latexové kuličky potažené specifickým antigenem nebo protilátkou. Shlukování latexových kuliček (aglutinace) indikuje přítomnost podezřelých částic.

latexový aglutinační test zahrnuje některé z výhod .Jsou to,

1. Schopnost získat semikvantitativní výsledky.
2. Nízké individuální náklady na test.
3. Relativně krátká doba k získání výsledků.

provedením 2 – až 10násobného ředění vzorků můžeme získat semikvantitativní výsledky .Latexový aglutinační test má také některé nevýhody, které zahrnují

1.Je třeba pečlivě interpretovat okrajové výsledky a
2. Problémy se specifičností v důsledku interferujících látek v mnoha testech.