Giemsa Stain – Princip, Postup, Výsledky, Interpretace

BY admin
|
Biologie Vzdělávací Videa

Naposledy Aktualizován dne 5. února roku 2020 tím, že Sagar Aryal

Úvod

Giemsa stain bylo jméno, které přijal z Německa Chemik, vědec, pro jeho použití kombinace činidel při prokazování přítomnosti parazitů malárie.

patří do skupiny skvrn známých jako romanowsky skvrny. Tyto jsou neutrální skvrny skládá ze směsi oxidovaného methylenová modř, azure a Eosin Y a jsou provedeny na vzduchu sušené snímek, který je post-fixovány methanolem. Romanowsky skvrny se používají při diferenciaci buněk, patologických vyšetřeních vzorků, jako jsou filmy krve a kostní dřeně a demonstrace parazitů, např. malárie. Existují čtyři typy skvrn Romanoswsky:

  • Giemsa stain
  • Jenner Skvrna
  • Wright stain
  • May-Grunwald Skvrna
  • Leishman skvrna

Cíle Giemsa stain

  • Přesně připravit zásobní roztok Giemsa stain
  • skvrna a určit krevní buňky,
  • rozlišovat krevní buňky, jádra z cytoplazmy

Princip

Giemsa stain je zlatý standard barvení technika, která se používá pro oba tenké a tlusté nátěry zkoumat krev na malárii parazitů, rutinní check-up, pro další krevní parazity a morfologicky diferencovat jadernou a cytoplazmu erytrocytů, leukocytů a krevních destiček a parazitů.

stejně Jako jakýkoli typ Romanowsky skvrny, je složen jak Kyselá a zásaditá barviva, ve vztahu k orientaci o kyselosti a basicity pro krevní buňky. Azurová a methylenová modř, základní barvivo se váže na kyselé jádro produkující modro-fialovou barvu. Eosin je kyselé barvivo, které je přitahováno k cytoplazmě a cytoplazmatickým granulím, které produkují alkalické červené zbarvení. Skvrna musí být pufrována vodou na pH 6,8 nebo 7.2, k vysrážení barviv k vázání jednoduchých materiálů.

Klasicky, Giemsa stain je diferenciální skvrna, která je vyrobena z kombinace činidel (Azure, Methylenová modř, Eosin barvení) široce používán v cytogenetiky a histopatologické vyšetření pro diagnostiku:

  1. Malárie, spirochety a další krevní paraziti
  2. Chlamydia trachomatis zařazení subjektů
  3. Borrelia spp
  4. Yersinia pestis
  5. Histoplasma spp
  6. Pneumocystis jiroveci cysty

Činidel Používaných

  • Methanol
  • Giemsa prášek
  • Glycerin
  • Vody (Vyrovnávací paměti)

Postup

Příprava Giemsa Stain Zásobní roztok (500ml)

  1. Do 250 ml methanolu, přidá 3,8 g Giemsa prášek a rozpustí se.
  2. roztok zahřejte až na ~60oC
  3. poté pomalu přidejte do roztoku 250 ml glycerinu.
  4. filtrujte roztok a nechte jej před použitím stát asi 1-2 měsíce.

Příprava Pracovního roztoku

  1. Přidat 10 ml zásobního roztoku do 80 ml destilované vody a 10 ml methanolu

postup Barvení 1: Tenký Film, barvení

  1. Na čisté a suché mikroskopické sklíčko, aby se tenký film vzorku (krev) a nechte uschnout na vzduchu.
  2. namočte nátěr (2-3 poklesy) do čistého methanolu pro fixaci nátěru, nechte 30 sekund sušit na vzduchu
  3. zaplavte sklíčko 5% roztokem Giemsa po dobu 20-30 minut.
  4. Flush s vodou z kohoutku a nechte zaschnout

POZNÁMKA: V případě nouze, nechte Giemsa stain roztoku po dobu 5-10 minut

Barvení Postup 2: Thick Film Barvení

  1. Přidat husté stěru z krve a suchý vzduch po dobu 1 hodiny na barvení stojanu.
  2. Dip hustou krev stěr do zředěného Giemsa stain (připraveny tím, že 1 ml zásobního roztoku a přidání do 49ml fosfátového pufru nebo destilované vody, ale výsledky se mohou lišit jinak).
  3. Mytí nátěru máčením v pufrované vody destilované vody po dobu 3-5 minut
  4. Nechte zaschnout

Výsledky

Cytoplazma a cytoplazmatické granule krevních buněk se objeví červené barvě, zatímco jádra se objeví modré-fialové barvy.

erytrocyty se objeví růžové v křupavě

  • Eosinofilů bude mít modro-fialové jádro, světle růžovou cytoplazmou, a oranžovo-červené granule.
  • neutrofily se objeví purpurově červené jádro a růžová cytoplazma.
  • bazofily budou mít fialové jádro a namodralé granule.
  • lymfocyty mají tmavě modré jádro a světle modrou cytoplazmu.
  • monocyty budou mít fialové jádro a růžovou cytoplazmu.
  • destičky budou mít fialové granule.

Giemsa Stain - Princip, Postup, Výsledky, Interpretace

Obrázek Zdroj: Wikipedia

Výklad

Azure a methylenové modři, základní barvivo se váže na kyselinu jádro produkující modré-fialové barvy. Eosin je kyselé barvivo, které je přitahováno k cytoplazmě a cytoplazmatickým granulím, které produkují alkalické červeno-oranžové zbarvení.

aplikace Giemsa stain

  1. Giemsa stain je specifický pro fosfátové skupiny DNA. Váže se na oblasti DNA s vysokým množstvím adenin-thyminové vazby.
  2. Giemsa stain se používá v Giemsa banding (g-banding), k barvení chromozomů a často se používá k vytvoření schematické reprezentace chromozomů (idiogram).
  3. jako diferenciální skvrna může být skvrna Giemsa použita ke studiu adherence patogenních bakterií k lidským buňkám, diferenciace lidských buněk jako fialové a bakteriální buňky jako růžové.
  4. může být použit pro histopatologickou diagnostiku malárie a některých spirochet a protozoálních krevních parazitů.
  5. používá se také ve Wolbachově tkáňové skvrně i.e barvení krvetvorné tkáně a pro identifikaci bakterií a rickettsia
  6. Giemsa stain je klasický film krev skvrnu na nátěrech periferní krve a kostní dřeně vzorků. Červené krvinky skvrny růžové, krevní destičky skvrny světle světle růžové, lymfocytární cytoplazma skvrny nebesky modré, monocytární cytoplazma skvrny bledě modré, a leukocytární jaderný chromatin skvrny purpurové.
  7. Giemsa stain je také používán k vizualizaci chromozomů, určení chromozomálních anomálií, jako je translokace a uspořádání,
  8. Giemsa skvrny houbou Histoplasma, Chlamydie bakterie, a mohou být použity k identifikaci Žírných buněk.

Výhody

  • Snadno dostupné, jednoduché na přípravu, údržbu a použití

Omezení

  • Pracovní Giemsa stain musí být připraven těsně před použitím.
  1. barvení techniky: Giemsa Kathleen P Freeman, Karen L Gerber: Vetstream
  2. Paramedic World; Hematologie Cvičení/Giemsa barvení Technika
  3. Jak Romanowsky skvrny práci a proč zůstávají cenné – včetně navrhované univerzální Romanowsky barvení mechanismus a racionální řešení problémů schéma Horobin RW./ncbi.nlm.nih.gov

Internetové Zdroje

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK