Northern blot

northernblot je laboratorní metoda používaná k detekci specifických molekul RNA mezi amixturou RNA. Northern blotting lze použít k analýze vzorku RNA z apartikulární tkáně nebo buněčného typu za účelem měření exprese RNA partikulárních genů. Tato metoda byla pojmenována pro svou podobnost s technikouznámý jako Jižní skvrna.

První krok v northern blot je, aby došlo k denaturaci, nebo samostatné, RNA rámci vzorek do jednotlivých pramenů, což zajišťuje, že prameny jsou rozložil a neexistuje žádné spojení mezi prameny. Molekuly RNA jsou pak oddělenypodle jejich velikosti metodou nazývanou gelová elektroforéza. Po separaci se RNA přenese z gelu na blotovací membránu.(Ačkoli tento krok dává technice název „northern blotting“, termín se obvykle používá k popisu celého postupu.) Jakmile je přenos dokončen, blotovací membrána nese všechny RNA pásy původně na gelu. Další, membrána je zacházeno s malým kouskem DNA nebo RNA říkáme sonda, která byla navržena tak, aby se sekvence, která je komplementární k určité sekvence RNA ve vzorku; to umožňuje sondy pro hybridizaci, orbind, na konkrétní RNA fragment na membráně. Kromě toho má sonda alabel, což je obvykle radioaktivní atom nebo fluorescenční barvivo. Po hybridizaci tedy sonda umožňuje, aby molekula RNA byla detekována z mnoha různých molekul RNA na membráně.