Proteináza k
aktivovaná vápníkem, enzym tráví proteiny přednostně po hydrofobních aminokyselinách (alifatické, aromatické a jiné hydrofobní aminokyseliny). I když ionty vápníku neovlivňují aktivitu enzymu, přispívají k jeho stabilitě.Proteiny budou zcela tráveny, pokud je inkubační doba dlouhá a koncentrace proteázy dostatečně vysoká. Po odstranění iontů vápníku je stabilita enzymu snížena,ale proteolytická aktivita zůstává. Proteináza K má dvě vazebná místa pro Ca2+, která jsou umístěna v blízkosti aktivního centra, ale nejsou přímo zapojena do katalytického mechanismu. Zbytková aktivita je dostatečná k trávení proteinů, které obvykle kontaminují přípravky nukleových kyselin. Proto, trávení s Proteinázy K pro purifikaci nukleových kyselin se obvykle provádí v přítomnosti EDTA (inhibice kov-ion závislé enzymy, jako jsou nukleázami).
Proteináza K je také stabilní v širokém rozmezí pH (4-12), s pH Optimem pH 8,0.Zvýšení reakční teploty z 37 °C na 50-60 °C může zvýšit aktivitu několikrát, jako přídavek 0,5–1% dodecyl sulfát sodný (SDS) nebo Guanidinium chloridu sodného (3 M), Guanidinium thiokyanát (1 M) a močoviny (4 M). Výše uvedené podmínky zvyšují aktivitu proteinázy K tím, že zpřístupňují místa štěpení substrátu. Teploty nad 65 °C, kyselina trichloroctová (TCA) nebo inhibitory serinové proteázy AEBSF, PMSF nebo DFP inhibují aktivitu. Proteinázu K, nebude inhibována Guanidinium chloridu sodného, Guanidinium thiokyanát, močoviny, Sarkosylu, Triton X-100, Tween 20, SDS, citrát, iodoacetic kyselina, EDTA nebo jiné serinové inhibitory proteázy, jako je Na-Tosyl-Lys Chlormethyl Keton (TLCK) a Na-Tosyl-Phe Chlormethyl Keton (TPCK).
Proteázy K činnosti v běžně používané pufry
| Pufru (pH = 8.0, 50 °C, 1.25 µg/mL proteázy K, 15 min inkubace) | proteinázu K činnosti (%) |
|---|---|
| 30 mM Tris·Cl | 100 |
| 30 mM Tris·Cl; 30 mM EDTA; 5% Tween 20; O 0,5% Triton X-100; 800 mM GuHCl | 313 |
| 36 mM Tris·Cl; 36 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.36% Triton X-100; 735 mM GuHCl | 301 |
| 10 mM Tris·Cl; 25 mM EDTA; 100 mM NaCl; 0.5% SDS | 128 |
| 10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 20 mM NaCl; 1% Sarkosylu | 74 |
| 10 mM Tris·Cl; 50 mM KCl; 1,5 mM MgCl2; 0.45% Tween 20; O 0,5% Triton X-100 | 106 |
| 10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 0.5% SDS | 120 |
| 30 Mm Tris*Cl; 10 mM EDTA; 1% SDS | 203 |