Giemsa-Färbung- Prinzip, Verfahren, Ergebnisse, Interpretation

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Zuletzt aktualisiert am 5. Februar 2020 von Sagar Aryal

Einführung

Giemsa-Fleck war ein Name, der von einem deutschen Chemiker für seine Anwendung einer Kombination von Reagenzien zum Nachweis des Vorhandenseins von Parasiten bei Malaria übernommen wurde.

Es gehört zu einer Gruppe von Flecken, die als Romanowsky-Flecken bekannt sind. Dies sind neutrale Flecken, die aus einer Mischung von oxidiertem Methylenblau, Azurblau und Eosin Y bestehen und auf einem luftgetrockneten Objektträger durchgeführt werden, der mit Methanol nachfixiert wird. Romanowsky-Färbungen werden bei der Differenzierung von Zellen, pathologischen Untersuchungen von Proben wie Blut- und Knochenmarkfilmen und dem Nachweis von Parasiten wie Malaria eingesetzt. Es gibt vier Arten von Romanoswsky-Flecken:

  • Giemsa-Fleck
  • Jenner-Fleck
  • Wright-Fleck
  • May-Grunwald-Fleck
  • Leishman-Fleck

Ziele des Giemsa-Flecks

  • Zur genauen Herstellung der Giemsa-Färbungsstammlösung
  • Zur Färbung und Identifizierung von Blutzellen
  • Zur Differenzierung von Blutzellkernen vom Zytoplasma

Prinzip

Giemsa Stain ist eine Goldstandard-Färbetechnik, die sowohl für dünne als auch für dicke Abstriche verwendet wird, um Blut auf Malariaparasiten zu untersuchen, eine Routineuntersuchung für andere Blutparasiten und morphologisch das Kern- und Zytoplasma von Erythrozyten, Leukozyten und Blutplättchen und Parasiten zu unterscheiden.

Wie jede Art von Romanowsky-Flecken besteht es sowohl aus den sauren als auch aus den basischen Farbstoffen in Bezug auf die Affinitäten von Säure und Basizität für Blutzellen. Azurblau und Methylenblau, ein basischer Farbstoff bindet an den Säurekern und erzeugt eine blau-violette Farbe. Eosin ist ein saurer Farbstoff, der vom Zytoplasma und den zytoplasmatischen Granula angezogen wird, die eine alkalisch produzierende rote Färbung aufweisen. Der Fleck muss mit Wasser auf pH 6,8 oder 7 gepuffert werden.2, um die Farbstoffe auszufällen, um einfache Materialien zu binden.

Klassisch ist Giemsa-Färbung eine Differentialfärbung, die aus einer Kombination von Reagenzien (Azurblau, Methylenblau und Eosinfarbstoff) besteht, die in der Zytogenetik und Histopathologie zur Diagnose von:

  1. Malaria, Spirochäten und andere Blutparasiten
  2. Chlamydia trachomatis inclusion bodies
  3. Borrelia spp.
  4. Yersinia pestis
  5. Histoplasma spp.
  6. Pneumocystis jiroveci Zysten

Verwendete Reagenzien

  • Methanol
  • Giemsa Pulver
  • Glycerin
  • Wasser (Puffer)

Verfahren

Herstellung der Giemsa Beizstammlösung (500ml)

  1. In 250 ml Methanol 3,8 g Giemsa-Pulver geben und auflösen.
  2. Erhitzen Sie die Lösung auf ~ 60oC
  3. Geben Sie dann langsam 250 ml Glycerin in die Lösung.
  4. Filtrieren Sie die Lösung und lassen Sie sie vor Gebrauch etwa 1-2 Monate stehen.

Vorbereitung der Arbeitslösung

  1. 10 ml Stammlösung zu 80 ml destilliertem Wasser und 10 ml Methanol geben

Färbeverfahren 1: Dünnschichtfärbung

  1. Machen Sie auf einem sauberen, trockenen mikroskopischen Objektträger einen dünnen Film der Probe (Blut) und lassen Sie sie an der Luft trocknen.
  2. Tauchen Sie den Abstrich (2-3 Dips) zur Fixierung des Abstrichs in reines Methanol und lassen Sie ihn 30 Sekunden an der Luft trocknen
  3. Fluten Sie den Objektträger 20-30 Minuten lang mit 5% iger Giemsa-Färbelösung.
  4. Mit Leitungswasser spülen und trocknen lassen

HINWEIS: Im Notfall die Giemsa-Färbelösung 5-10 Minuten einwirken lassen

Färbeverfahren 2: Dickschichtfärbung

  1. Fügen Sie einen dicken Blutabstrich hinzu und trocknen Sie ihn 1 Stunde lang auf einem Färbeständer an der Luft.
  2. Tauchen Sie den dicken Blutausstrich in verdünnten Giemsa-Fleck (hergestellt durch Einnahme von 1 ml der Stammlösung und Zugabe zu 49 ml Phosphatpuffer oder destilliertem Wasser, die Ergebnisse können jedoch unterschiedlich sein).
  3. Waschen Sie den Abstrich, indem Sie ihn 3-5 Minuten lang in gepuffertes Wasser mit destilliertem Wasser tauchen
  4. Trocknen lassen

Ergebnisse

Das Zytoplasma und die zytoplasmatischen Granula der Blutzellen erscheinen rot, während der Zellkern blauviolett erscheint.

Die Erythrozyten erscheinen in Clour rosa

  • Eosinophile haben einen blau-violetten Kern, ein blassrosa Zytoplasma und orangerote Körnchen.
  • Neutrophile erscheinen lila-roter Kern und ein rosa Zytoplasma.
  • Basophile haben einen violetten Kern und bläuliche Körnchen.
  • Lymphozyten haben einen dunkelblauen Kern und ein hellblaues Zytoplasma.
  • Monozyten haben einen violetten Kern und ein rosa Zytoplasma.
  • Blutplättchen haben violette Körnchen.

Giemsa-Färbung- Prinzip, Verfahren, Ergebnisse, Interpretation

Bildquelle: Wikipedia

Interpretation

Azurblau und Methylenblau, ein basischer Farbstoff, bindet an den Säurekern und erzeugt eine blau-violette Farbe. Eosin ist ein saurer Farbstoff, der vom Zytoplasma und den zytoplasmatischen Granula angezogen wird, die eine alkalisch produzierende rot-orange Färbung aufweisen.

Anwendungen Giemsa-Färbung

  1. Giemsa-Färbung ist spezifisch für die Phosphatgruppen der DNA. Es bindet sich an Regionen der DNA mit hohen Mengen an Adenin-Thymin-Bindung.
  2. Giemsa-Färbung wird beim Giemsa-Banding (G-Banding) verwendet, um Chromosomen zu färben, und es wird oft verwendet, um eine schematische Darstellung von Chromosomen (Idiogramm) zu erstellen.
  3. Als Differentialfärbung kann die Giemsa-Färbung verwendet werden, um die Anhaftung pathogener Bakterien an menschliche Zellen zu untersuchen und menschliche Zellen als lila und Bakterienzellen als rosa zu differenzieren.
  4. Es kann zur histopathologischen Diagnose von Malaria und einigen Spirochäten- und Protozoen-Blutparasiten verwendet werden.
  5. Es wird auch in Wolbachs Gewebefärbung i verwendet.e Färbung von hämatopoetischem Gewebe und zur Identifizierung von Bakterien und Rickettsien
  6. Die Giemsa-Färbung ist eine klassische Blutfilmfärbung für periphere Blutausstriche und Knochenmarksproben. Rote Blutkörperchen färben sich rosa, Blutplättchen färben sich hellrosa, Lymphozyten-Zytoplasma färbt sich himmelblau, Monozyten-Zytoplasma färbt sich hellblau und Leukozyten-Kernchromatin färbt sich magenta.
  7. Giemsa-Färbung wird auch verwendet, um Chromosomen zu visualisieren, Chromosomenanomalien wie Translokation und Umlagerung zu identifizieren,
  8. Giemsa färbt den Pilz Histoplasma, Chlamydienbakterien und kann verwendet werden, um Mastzellen zu identifizieren.

Vorteile

  • Leicht verfügbar, einfach zuzubereiten, zu warten und zu verwenden

Einschränkungen

  • Arbeits Giemsa Fleck muss kurz vor dem Gebrauch vorbereitet werden.
  1. Färbetechniken: Giemsa von Kathleen P Freeman, Karen L Gerber: Vetstream
  2. Paramedic World; Hämatologie-Praktika / Giemsa-Färbetechnik
  3. Wie Romanowsky-Färbungen funktionieren und warum sie wertvoll bleiben – einschließlich eines vorgeschlagenen universellen Romanowsky-Färbemechanismus und eines rationalen Fehlerbehebungsschemas von Horobin RW./ncbi.nlm.nih.gov

Internetquellen

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK