Northern Blot

Ein Northernblot ist eine Labormethode zum Nachweis spezifischer RNA-Moleküle unter einer Mischung von RNA. Northern Blotting kann verwendet werden, um eine Probe von RNA aus apartikulärem Gewebe oder Zelltyp zu analysieren, um die RNA-Expression von partikulären Genen zu messen. Diese Methode wurde wegen ihrer Ähnlichkeit mit der Technik benanntbekannt als Southern Blot.

Der erste Schritt in einem Northern Blot besteht darin, die RNA in der Probe in Einzelstränge zu denaturieren oder zu trennen, wodurch sichergestellt wird, dass die Stränge entfaltet werden und keine Bindung zwischen den Strängen besteht. Die RNA-Moleküle werden dann nach ihrer Größe unter Verwendung einer Methode, die als Gelelektrophorese bezeichnet wird, getrennt. Nach der Trennung wird die RNA aus dem Gel auf eine Blottingmembran übertragen.(Obwohl dieser Schritt der Technik den Namen „Northern Blotting“ gibt, wird der Begriff normalerweise verwendet, um das gesamte Verfahren zu beschreiben.) Sobald der Transfer abgeschlossen ist, trägt die Blottingmembran alle ursprünglich auf dem Gel befindlichen RNA-Banden. Als nächstes wird die Membran mit einem kleinen Stück DNA oder RNA behandelt, das als Sonde bezeichnet wirdeine Sonde, die entworfen wurde, um eine Sequenz zu haben, die komplementär zur apartikulären RNA-Sequenz in der Probe ist; Dies ermöglicht der Sonde, an ein spezifisches RNA-Fragment auf der Membran zu hybridisieren oder zu binden. Zusätzlich weist die Sonde Alabel auf, bei dem es sich typischerweise um ein radioaktives Atom oder einen Fluoreszenzfarbstoff handelt. So erlaubt die Sonde nach der Hybridisierung, das interessierende RNA-Molekül unter den vielen verschiedenen RNA-Molekülen auf der Membran nachzuweisen.