TUNEL-Färbung und der TUNEL-Assay
Gao Y et al. verwendetes HRP-DAB TUNEL Assay Kit ab206386 zur Analyse von Gewebeschnitten aus Maus-Eierstöcken. Abschnitt, der mit DNase I als Positivkontrolle behandelt wurde. b. Negativkontrolle ohne TdT-Enzym. c und f. repräsentative experimentelle Bilder. Mit dem TUNEL-Assay gefärbte Kerne sind braun. Abschnitte wurden mit Methylgrün gegengefärbt.
Vor- und Nachteile von TUNEL-Färbemethoden
TUNEL-Färbungs- / TUNEL-Assay-Protokolle, die ein Nukleotid verwenden, das direkt mit einem Fluoreszenzfarbstoff markiert ist, sind schneller als indirekte Methoden, die entweder einen Antikörper oder einen Streptavidin-Biotin-Komplex verwenden, da sie weniger Färbeschritte erfordern.
Methoden, die auf Biotin-markierten Nukleotiden beruhen, können von der Amplifikation des Streptavidin-Biotin-Komplexes profitieren. Sie erfordern zusätzliche Blockierungsschritte, um endogenes Biotin zu neutralisieren und die Hintergrundfärbung zu reduzieren, obwohl diese allen Forschern gemeinsam sind, die traditionelle chromogene Immunhistochemie betreiben.
BrdU-basierte Methoden können auch ein helleres Signal erzeugen, da BrdU typischerweise leichter vom TdT-Enzym aufgenommen wird.
Die relative Beliebtheit von TUNEL-Färbe- / TUNEL-Assay-Methoden
Eine Umfrage unter 50 im Jahr 2017 veröffentlichten Forschungsarbeiten, die den Begriff „TUNEL-Assay“ oder „TUNEL-Färbung“ enthielten, ergab, dass:
– 50% der Papiere verwendeten dUTP direkt konjugiert an FITC
– 15% verwendeten Biotin-dUTP und Streptavidin-HRP
– 15% verwendeten FITC-dUTP und einen an HRP konjugierten Anti-FITC-Antikörper
– 12% verwendeten Digoxygenin-dUTP und einen an einen Fluoreszenzfarbstoff oder HRP konjugierten Anti-Digoxygenin-Antikörper
– 8% verwendeten Br-dUTP und einen an einen Fluoreszenzfarbstoff konjugierten Anti-BrdU-Antikörper
Alle untersuchten Arbeiten verwendeten den TUNEL-Assay eher in der Bildgebung als in der Durchflusszytometrie. Wo HRP verwendet wurde, wurde DAB-Substrat hinzugefügt, um einen braunen Fleck zu erzeugen. Mehr als 90% der Forschungsarbeiten verwendeten ein Kit für die TUNEL-Färbung.