Principio de Tinción de Giemsa, Procedimiento, Resultados, Interpretación

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Última actualización el 5 de febrero de 2020 por Sagar Aryal

Introducción

Tinción de Giemsa fue un nombre adoptado de un científico químico alemán, para su aplicación de una combinación de reactivos para demostrar la presencia de parásitos en la malaria.

Pertenece a un grupo de manchas conocidas como manchas Romanowsky. Estas son manchas neutras compuestas por una mezcla de azul de metileno oxidado, azul y Eosina Y y se realizaron en un portaobjetos secado al aire que se fija con metanol. Las manchas de Romanowsky se aplican en la diferenciación de células, exámenes patológicos de muestras como películas de sangre y médula ósea y demostración de parásitos, por ejemplo, malaria. Hay cuatro tipos de manchas Romanoswsky:

  • Tinción de Giemsa
  • Tinción de Jenner
  • Tinción de Wright
  • Tinción de May-Grunwald
  • Tinción de Leishman

Objetivos de la tinción de Giemsa

  • Para preparar con precisión la solución madre de tinción de Giemsa
  • Para teñir e identificar células sanguíneas
  • Para diferenciar los núcleos de células sanguíneas del citoplasma

Principio

La tinción de Giemsa es una técnica de tinción estándar de oro que se utiliza para frotis finos y gruesos para examinar la sangre en busca de parásitos de la malaria, un chequeo de rutina para otros parásitos de la sangre y para diferenciar morfológicamente el núcleo y el citoplasma de Eritrocitos, leucocitos y Plaquetas y parásitos.

Como cualquier tipo de tintes Romanowsky, se compone de tintes Ácidos y Básicos, en relación con afinidades de acidez y basicidad para las células sanguíneas. Azul celeste y azul de metileno, un tinte básico se une al núcleo ácido produciendo un color azul púrpura. La eosina es un tinte ácido que es atraído por el citoplasma y los gránulos citoplásmicos que producen coloración roja alcalina. La mancha debe ser tamponada con agua a un pH de 6,8 o 7.2, para precipitar los tintes para unir materiales simples.

Clásicamente, la tinción de Giemsa es una tinción diferencial que se compone de una combinación de reactivos (azul, azul de metileno y tinte de Eosina) utilizados ampliamente en citogenética e histopatología para el diagnóstico de:

  1. Malaria, espiroquetas y otros parásitos sanguíneos
  2. Cuerpos de inclusión de Chlamydia trachomatis
  3. Borrelia spp
  4. Yersinia pestis
  5. Histoplasma spp
  6. Quistes de Pneumocystis jiroveci

Reactivos Utilizados

  • Metanol
  • Polvo de Giemsa
  • Glicerina
  • Agua (tampón)

Procedimiento

Preparación de la solución Madre de tinción de Giemsa (500 ml)

  1. En 250 ml de metanol, agregue 3,8 g de polvo de Giemsa y disuelva.
  2. Calentar la solución hasta ~60oC
  3. Luego, agregue 250 ml de glicerina a la solución, lentamente.
  4. Filtre la solución y déjela reposar durante aproximadamente 1-2 meses antes de usarla.

Preparación de la solución de trabajo

  1. Añadir 10 ml de solución madre a 80 ml de agua destilada y 10 ml de metanol

Procedimiento de tinción 1: Tinción de película fina

  1. En un portaobjetos de vidrio microscópico limpio y seco, haga una película delgada de la muestra (sangre) y déjela secar al aire.
  2. sumergir el frotis (2-3 inmersiones) en metanol puro para la fijación del frotis, dejar secar al aire durante 30 segundos
  3. Inundar el portaobjetos con solución de tinción de Giemsa al 5% durante 20-30 minutos.
  4. Enjuague con agua del grifo y deje secar

NOTA: En caso de emergencia, deje la solución para manchas de Giemsa durante 5-10 minutos

Procedimiento de tinción 2: Tinción de película gruesa

  1. Agregue una mancha espesa de sangre y seque al aire durante 1 hora en una rejilla de tinción.
  2. Sumergir el frotis espeso de sangre en la tinción diluida de Giemsa (preparada tomando 1 ml de la solución madre y añadiendo 49 ml de tampón de fosfato o agua destilada, pero los resultados pueden variar de forma diferente).
  3. Lave el frotis sumergiéndolo en agua tamponada de agua destilada durante 3-5 minutos
  4. Déjelo secar

Resultados

El citoplasma y los gránulos citoplásmicos de células sanguíneas aparecen de color rojo, mientras que el núcleo aparece de color azul púrpura.

Los eritrocitos aparecerán de color rosa en el clavo

  • Los eosinófilos tendrán un núcleo azul púrpura, un citoplasma rosa pálido y gránulos de color rojo anaranjado.
  • Los neutrófilos aparecerán con un núcleo rojo púrpura y un citoplasma rosado.
  • Los basófilos tendrán un núcleo púrpura y gránulos azulados.
  • Los linfocitos tienen un núcleo azul oscuro y un citoplasma azul claro.
  • Los monocitos tendrán un núcleo púrpura y un citoplasma rosado.
  • Las plaquetas tendrán gránulos morados.

Tinción de Giemsa: Principio, Procedimiento, Resultados, Interpretación

Fuente de la imagen: Wikipedia

Interpretación

Azul y azul de metileno, un tinte básico que se une al núcleo ácido produciendo un color azul púrpura. La eosina es un tinte ácido que es atraído por el citoplasma y los gránulos citoplásmicos que son de coloración rojo anaranjada productora de alcalinos.

Aplicaciones Tinción de Giemsa

  1. La tinción de Giemsa es específica para los grupos fosfato de ADN. Se adhiere a regiones de ADN con altas cantidades de unión adenina-timina.
  2. La tinción de Giemsa se usa en bandas de Giemsa (bandas G), para teñir cromosomas y a menudo se usa para crear una representación diagramática de cromosomas (idiograma).
  3. Al ser una tinción diferencial, la tinción de Giemsa se puede utilizar para estudiar la adherencia de bacterias patógenas a las células humanas, diferenciando las células humanas como moradas y las células bacterianas como rosadas.
  4. Se puede utilizar para el diagnóstico histopatológico de la malaria y algunos parásitos sanguíneos de espiroquetas y protozoos.
  5. También se utiliza en la tinción de tejido de Wolbach i.tinción de tejido hematopoyético y para la identificación de bacterias y rickettsia
  6. La tinción de Giemsa es una tinción clásica con película de sangre para frotis de sangre periférica y muestras de médula ósea. Los glóbulos rojos se tiñen de rosa, las plaquetas se tiñen de rosa pálido claro, el citoplasma de linfocitos se tiñe de azul cielo, el citoplasma de monocitos se tiñe de azul pálido y la cromatina nuclear de leucocitos se tiñe de magenta.
  7. La tinción de Giemsa también se usa para visualizar cromosomas, identificando anomalías cromosómicas como translocación y reordenamiento,
  8. Giemsa tiñe el histoplasma del hongo, la bacteria Clamidia y se puede usar para identificar mastocitos.

Ventajas

  • Fácilmente disponible, fácil de preparar, mantener y usar

Limitaciones

  • La tinción de trabajo de Giemsa debe prepararse poco antes de su uso.
  1. Técnicas de tinción: Giemsa por Kathleen P Freeman, Karen L Gerber: Vetstream
  2. Mundo paramédico; Prácticas de Hematología / Técnica de tinción de Giemsa
  3. Cómo funcionan las manchas de Romanowsky y por qué siguen siendo valiosas, incluido un mecanismo de tinción universal propuesto de Romanowsky y un esquema racional de solución de problemas de Horobin RW. / ncbi.nlm.nih. gov

Fuentes de Internet

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK