Tinción de TÚNEL y el ensayo de TÚNEL
Gao Y et al. se utilizó el kit de ensayo de túnel HRP-DAB ab206386 para analizar secciones de tejido de ovarios de ratón. a. Sección tratada con DNasa I como control positivo. b. Control negativo sin enzima TdT. c y f. imágenes experimentales representativas. Los núcleos teñidos con el ensayo de TÚNEL son marrones. Las secciones se teñían con verde Metílico.
Ventajas y desventajas de los métodos de tinción de TÚNEL
Los protocolos de tinción de TÚNEL / ensayo de TÚNEL que utilizan un nucleótido etiquetado directamente con un tinte fluorescente son más rápidos que los métodos indirectos, que utilizan un anticuerpo o un complejo estreptavidina-biotina, ya que requieren menos pasos de tinción.
Los métodos que se basan en nucleótidos marcados con biotina pueden beneficiarse de la amplificación del complejo estreptavidina-biotina. Requieren pasos de bloqueo adicionales para neutralizar la biotina endógena y reducir la tinción de fondo, aunque estos son comunes a todos los investigadores que ejecutan inmunohistoquímica cromogénica tradicional.
Los métodos basados en BrdU también pueden producir una señal más brillante, ya que BrdU normalmente se incorpora más fácilmente por la enzima TdT.
La popularidad relativa de los métodos de tinción de TÚNEL/ensayo de TÚNEL
Una encuesta de 50 artículos de investigación publicados en 2017 que contenían el término «ensayo de TÚNEL» o «tinción de TÚNEL», reveló que:
– el 50% de los papeles utiliza dUTP conjugado directamente con FITC
– el 15% utiliza biotina-dUTP y estreptavidina-HRP
– el 15% utiliza FITC-dUTP y un anticuerpo anti-FITC conjugado con HRP
– el 12% utiliza digoxigenina-dUTP y un anticuerpo anti-digoxigenina conjugado con un colorante fluorescente o HRP
– El 8% utilizó Br-dUTP y un anticuerpo anti-BrdU conjugado con un colorante fluorescente
Todos los trabajos encuestados utilizaron el ensayo TUNEL en imágenes en lugar de citometría de flujo. Donde se utilizó HRP, se agregó sustrato DAB para crear una mancha marrón. Más del 90% de los trabajos de investigación utilizaron un kit para la tinción de TÚNEL.