Giemsa Stain – Principle, Procedure, Results, Interpretation

BY admin
|
Biology Educational Videos

Last Updated on February 5, 2020 by Sagar Aryal

Introduction

Giemsa stain sai nimensä saksalaiselta Kemistitieteilijältä, koska hän käytti reagenssiyhdistelmää osoittaakseen loisten esiintymisen malariassa.

se kuuluu romanowsky-tahrojen ryhmään. Nämä ovat neutraaleja tahroja, jotka koostuvat hapettuneen metyleenisinisen, taivaansinisen ja Eosiinin seoksesta, ja ne on tehty ilmakuivattuun liukumäkeen, joka on jälkikäteen kiinnitetty metanolilla. Romanowsky-tahroja käytetään solujen erilaistumisessa, veren ja luuytimen kaltaisten näytteiden patologisissa tutkimuksissa ja loisten, kuten malarian, osoittamisessa. Romanoswsky-tahroja on neljää tyyppiä:

  • Giemsa stain
  • Jenner Stain
  • Wright stain
  • May-Grunwald Stain
  • Leishman stain

Objectives of Giemsa stain

  • Giemsa stain stag-kantaliuoksen tarkka valmistaminen
  • verisolujen värjäämiseksi ja tunnistamiseksi
  • verisolujen tumien erottamiseksi sytoplasmasta

periaate

Giemsa stain on gold standard-värjäystekniikka, jota käytetään sekä ohuille että paksuille tahroille veren tutkimiseen malarialoisten varalta, rutiinitarkastus muut veren loiset ja morfologisesti erottaa ydin-ja sytoplasma punasolujen, leukosyyttien ja verihiutaleiden ja loisten.

kuten kaikki Romanowsky-tahrat, se koostuu sekä happamista että emäksisistä väriaineista, suhteessa happamuuden ja emäksisyyden affiniteettiin verisoluissa. Azure ja metyleenisininen, perus väriaine sitoutuu happoytimeen, joka tuottaa sinipunaista väriä. Eosiini on hapan väriaine, joka vetää puoleensa sytoplasmaa ja sytoplasmarakeita, jotka ovat emäksistä tuottavaa punaista väriä. Tahra on puskuroitava vedellä pH: ksi 6,8 tai 7.2, saostamaan väriaineita yksinkertaisten materiaalien sitomiseksi.

klassisesti Giemsa-tahra on differentiaalitahra, joka koostuu reagenssien (taivaansininen, metyleenisininen ja eosiiniväriaine) yhdistelmästä, jota käytetään laajalti sytogenetiikassa ja histopatologiassa:

  1. Malaria, spirokeetat ja muut veren loiset
  2. Chlamydia trachomatis inclusion bodies
  3. Borrelia spp
  4. Yersinia pestis
  5. Histoplasma spp
  6. Pneumocystis jiroveci kystat
  7. Pneumocystis jiroveci 4482 >

    käytetyt reagenssit

    • metanoli
    • Giemsa-jauhe
    • glyseriini
    • vesi (puskuri)

    menettely

    Giemsa Stain Stock solution-liuoksen valmistus (500 ml)

    1. lisätään 250 ml: aan metanolia 3, 8 g Giemsa-jauhetta ja liuotetaan.
    2. Kuumenna liuos ~60oc
    3. ja lisää sitten 250 ml glyseriiniä liuokseen hitaasti.
    4. liuos suodatetaan ja annetaan seistä noin 1-2 kuukautta ennen käyttöä.

    käyttöliuoksen valmistus

    1. lisätään 10 ml Kantaliuosta 80 ml: aan tislattua vettä ja 10 ml: aan metanolia

    värjäysmenetelmä 1: Ohutkalvovärjäys

    1. tee näytteestä (verestä) ohut kalvo puhtaalle, kuivalle mikroskooppiselle lasilevylle ja jätä se ilmakuivattavaksi.
    2. kasta preparaatti (2-3 dippiä) puhtaaseen metanoliin preparaatin kiinnittämiseksi, anna ilmakuivata 30sekuntia
    3. täytä levy 5-prosenttisella Giemsa-tahraliuoksella 20-30 minuutin ajan.
    4. huuhdellaan vesijohtovedellä ja annetaan kuivua

    huomautus: hätätilanteissa jätetään Giemsa-tahraliuos 5-10 minuutiksi

    värjäysmenetelmä 2: Paksukalvovärjäys

    1. lisää paksu preparaatti verta ja ilmakuiva 1 tunti värjäystelineeseen.
    2. kasta paksu veritahra laimennettuun Giemsa-tahraan (valmistetaan ottamalla 1 ml Kantaliuosta ja lisäämällä 49 ml fosfaattipuskuria tai tislattua vettä, mutta tulokset voivat vaihdella eri tavalla).
    3. pese tahra upottamalla puskuroituun tislattuun veteen 3-5 minuutiksi
    4. anna sen kuivua

    tulokset

    verisolujen sytoplasma ja sytoplasmarakeet näyttävät väriltään punaisilta, kun taas tuma on väriltään sinipunainen.

    punasolut näyttävät vaaleanpunaisilta clour

    • eosinofiileillä on sinipunainen Tuma, vaalean vaaleanpunainen sytoplasma ja oranssinpunaiset rakeet.
    • Neutrofiileille ilmestyy purppuranpunainen ydin ja vaaleanpunainen sytoplasma.
    • Basofiileilla on violetti tuma ja sinertäviä rakeita.
    • lymfosyyteillä on tummansininen tuma ja vaaleansininen sytoplasma.
    • monosyyteissä on violetti tuma ja vaaleanpunainen sytoplasma.
    • verihiutaleissa on violetteja rakeita.

    Giemsa Stain-Principle, Procedure, Results, Interpretation

    Image Source: Wikipedia

    Interpretation

    Azure ja metyleenisininen, perusväri sitoutuu sinipunaväriä tuottavaan happotumakkeeseen. Eosiini on hapan väriaine, joka vetää puoleensa sytoplasmaa ja sytoplasmarakeita, jotka ovat emäksistä tuottavaa punaoranssia väriä.

    Sovellukset Giemsa-tahra

    1. Giemsa-tahra on spesifinen DNA: n fosfaattiryhmille. Se kiinnittyy DNA: n alueisiin, joissa on suuria määriä adeniini-tymiinisidosta.
    2. Giemsa-tahraa käytetään Giemsa-bandingissa (G-banding) kromosomien värjäämiseen ja sitä käytetään usein kromosomien diagrammisen esityksen (idiogrammi) luomiseen.
    3. koska Giemsa-tahra on differentiaalitahra, voidaan tutkia patogeenisten bakteerien kiinnittymistä ihmissoluihin, erottaen ihmisen solut violeteiksi ja bakteerisolut vaaleanpunaisiksi.
    4. sitä voidaan käyttää malarian histopatologiseen diagnosointiin ja joihinkin spirokeeta-ja alkueläinloisiin.
    5. sitä käytetään myös Wolbachin kudostahrassa i.e hematopoieettisen kudoksen värjäys ja bakteerien ja rikettsian tunnistamiseen
    6. Giemsa-tahra on klassinen verikalvotahra perifeerisen veren smeareille ja luuydinnäytteille. Punasolut värjäävät vaaleanpunaisia, verihiutaleet vaaleita vaaleanpunaisia, lymfosyyttien sytoplasmatahrat taivaansinisiä, monosyyttien sytoplasmatahrat vaaleansinisiä ja leukosyyttien ydinkromatiinitahrat magentanpunaisia.
    7. Giemsa-tahraa käytetään myös kromosomien visualisointiin, kromosomipoikkeavuuksien kuten translokaation ja uudelleenjärjestelyn tunnistamiseen,
    8. Giemsa värjää sienen Histoplasman, Klamydiabakteerin, ja sitä voidaan käyttää syöttösolujen tunnistamiseen.

    edut

    • helposti saatavilla, helppo valmistaa, huoltaa ja käyttää

    rajoitukset

    • työperäinen Giemsa-tahra on valmistettava vähän ennen käyttöä.
    1. värjäystekniikat: Giemsa by Kathleen P Freeman, Karen L Gerber: Vetstream
    2. ensihoitajien maailma; Hematology Practicals / Giemsa-värjäystekniikka
    3. miten Romanowsky-tahrat toimivat ja miksi ne pysyvät arvokkaina-mukaan lukien horobin RW: n ehdottama yleinen Romanowsky-värjäysmekanismi ja rationaalinen vianmääritysohjelma./NCBI.nlm.nih.gov

    Internet-lähteet

    • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
    • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
    • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
    • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
    • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
    • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
    • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
    • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK