Northern blot

a northernblot on laboratoriomenetelmä, jota käytetään tiettyjen RNA-molekyylien havaitsemiseen RNA: n amixturen joukossa. Northern blotting – menetelmällä voidaan analysoida apartikulaarisen kudoksen tai solutyypin RNA-näytettä, jotta voidaan mitata erikoisgeenien RNA-ilmentymistä. Menetelmä on saanut nimensä siitä, että se muistuttaa tekniikkaa, joka tunnetaan nimellä Southern blot.

ensimmäinen askel pohjoisessa täplässä on denaturoida tai erottaa otoksessa oleva RNA yksittäisiksi säikeiksi, mikä varmistaa, että säikeet ovat avautuneet ja että säikeiden välillä ei ole sidosta. Tämän jälkeen RNA-molekyylit erotellaan niiden koon mukaan geelielektroforeesiksi kutsutulla menetelmällä. Tämän jälkeen RNA siirtyy geelistä blottauskalvolle.(Vaikka tämä vaihe antaa tekniikalle nimen ”northern blotting”, termiä käytetään tyypillisesti kuvaamaan koko menettelyä.) Kun Transfer on valmis, blottauskalvo kuljettaa kaikki RNA-nauhat alun perin geelin päällä. Seuraavaksi kalvoa käsitellään pienellä DNA-tai RNA calleda-koettimella, jolla on suunniteltu otoksessa olevaa apartikulaarista RNA-sekvenssiä täydentävä sekvenssi; näin luotain voi hybridisoitua eli orbindata tiettyyn RNA-fragmenttiin kalvolla. Lisäksi luotaimessa on alabel, joka on tyypillisesti radioaktiivinen atomi tai fluoresoiva väriaine. Täten hybridisaation jälkeen luotain sallii kiinnostavan RNA-molekyylin bedetisoitua kalvon monien eri RNA-molekyylien joukosta.