tavoite

oppia lateksiagglutinaatiotekniikka.

Lateksiagglutinaatiota havaitaan, kun spesifistä antigeenia (tai vasta-ainetta) sisältävä näyte sekoitetaan vasta-aineeseen (tai antigeeniin), joka on päällystetty lateksihiukkasten pinnalla.

Latex agglutinaatiotestejä on sovellettu kliinisissä laboratorioissa tartuntatautien toteamiseen, ja vuonna 1956 Singer ja Plotz kuvasivat ensimmäisen kerran Nivelreumatekijän testin, joka perustuu lateksiagglutinaatioon. Nivelreumassa (RA) synoviaalinivelen lymfosyyttien tuottamat IgG-vasta-aineet reagoivat IgM-vasta-aineiden (RF, reumatekijä) kanssa muodostaen immuunikomplekseja, jotka aktivoivat komplementtia ja aiheuttavat kudostuhoa. Nivelreuma on diagnostisesti merkittävä.

sen jälkeen monet yritykset ympäri maailmaa ovat kehittäneet ja markkinoineet testejä mikrobi-ja virusinfektioiden, autoimmuunisairauksien, hormonien, lääkkeiden ja seerumiproteiinien havaitsemiseksi. Periaatetta käytetään diagnosoinnissa monia infektioita, kuten hepatiitti B, H. influenzae, N. meningitidis, jne.. Kaikki menetelmät antigeenin tai vasta-aineen havaitsemiseksi tai kvantitoimiseksi hyödyntävät sitä, että ne reagoivat muodostaen kompleksin. Optimaalisessa antigeeni-vasta-ainepitoisuudessa tämä kompleksi saostuu. Jos antigeeni on kuitenkin luonteeltaan hiukkasmaista, havaitaan antigeeni-vasta-ainekompleksin agglutinaatio.

Agglutinaatioreaktiot

hiukkasantigeenin ja vasta-aineen välinen reaktio aiheuttaa näkyvää paakkuuntumista, jota kutsutaan agglutinaatioksi. Tällaisia reaktioita synnyttäviä vasta-aineita kutsutaan agglutiniineiksi. Agglutinaatioreaktioiden periaate on samanlainen kuin saostumisreaktioiden; ne riippuvat polyvalenttien antigeenien ristisilloituksesta. Kun antigeeni on erytrosyytti, sitä kutsutaan hemagglutinaatioksi.Teoriassa kaikki vasta-aineet voivat agglutinoida hiukkasantigeenejä, mutta IgM, koska sen suuri spesifisyys on erityisen hyvä agglutiniini.

agglutinaatiota ei voida havaita, kun vasta-ainepitoisuus on suuri (pienemmät laimennokset) ja sitten näyte laimennetaan, agglutinaatio tapahtuu. Prozone-ilmiö määritellään agglutinaation näkymättömyydeksi suurilla vasta-ainepitoisuuksilla. Se johtuu siitä, että ylimääräinen vasta-aine muodostaa hyvin pieniä komplekseja, jotka eivät paakkuunnu muodostaen näkyvää agglutinaatiota.

kvalitatiivinen agglutinaatiotesti

Agglutinaatiotesti voidaan määrittää kvalitatiivisesti antigeenin tai vasta-aineen toteamiseksi. Vasta-aine sekoitetaan hiukkasantigeenin kanssa ja positiivinen testi osoitetaan hiukkasantigeenin agglutinaatiolla.

esimerkiksi potilaan veriryhmän määrittämiseksi henkilön punasoluihin voidaan sekoittaa vasta-ainetta veriryhmän antigeenille. Toinen esimerkki on, että vasta-aineiden esiintymisen määrittämiseksi potilasnäytteessä potilaan seerumi sekoitetaan tunnetun veriryhmän punasolujen (RBC) kanssa.

kvantitatiivinen agglutinaatiotesti

hiukkasantigeenien vasta-ainetason mittaamiseksi agglutinaatiotestiä voidaan käyttää laajalti. Tätä testiä varten näytteestä voidaan tehdä sarjalaimennoksia ja testata vasta-aine. Sen jälkeen siihen voidaan lisätä tietty määrä hiukkasantigeenia tai bakteereita tai punasoluja. Määritetään suurin laimennos, joka muodostaa agglutinaation, ja tätä suurinta havaittavan agglutinaation antavaa laimennosta kutsutaan titteriksi. Tulokset esitetään näkyvän agglutinaation muodostavan suurimman laimennoksen käänteislukuna.

passiivinen Hemagglutinaatio

agglutinaatioreaktioiden herkkyys ja yksinkertaisuus voidaan laajentaa liukeneviin antigeeneihin passiivisen heme-agglutinaation tekniikalla. Tässä tekniikassa antigeenipinnoitettuja punasoluja valmistetaan sekoittamalla liukoista antigeenia parkkihapolla tai kromikloridilla käsiteltyihin punasoluihin, jotka molemmat edistävät antigeenin adsorptiota solujen pinnalle. Punasoluja on kuitenkin mahdollista päällystää liukoisella antigeenillä (esim.. virusantigeeni, polysakkaridi tai hapten) ja käytetään päällystettyjä punasoluja agglutinaatiotestissä vasta-aineen määrittämiseksi liukoiselle antigeenille.

sarjalaimennettua seerumia, joka sisältää vasta-ainetta, Ladataan mikrotiitterilevyn jokaiseen kuoppaan, minkä jälkeen jokaiseen kuoppaan levitetään antigeenipäällysteiset punasolut. Agglutinaatioreaktioiden määrittämisessä käytetään apuna agglutinoituneiden punasolujen tyypillistä mallia kuoppiin. Jos antigeeni on hiukkasmainen, antigeeni voi reagoida vasta-aineen kanssa seerumissa ja johtaa antigeenin paakkuuntumiseen, mikä osoittaa positiivisen tuloksen.

viime vuosien aikana punasoluista on siirrytty synteettisiin hiukkasiin, kuten lateksihelmiin. Valmiste voidaan käyttää välittömästi tai säilyttää myöhempää käyttöä varten. Synteettisten helmien käyttö tarjoaa johdonmukaisuuden, yhdenmukaisuuden ja vakauden edut. Lisäksi synteettisiä helmiä käyttävät agglutinaatioreaktiot voidaan lukea nopeasti, usein 3-5 minuutin kuluessa helmien sekoittamisesta testinäytteeseen. Perustuipa se punasoluihin tai kätevämpiin ja monipuolisempiin synteettisiin helmiin, agglutinaatioreaktiot ovat yksinkertaisia suorittaa, eivät vaadi kalliita laitteita ja havaitsevat pienen määrän vasta-aineita ( pitoisuudet niinkin alhaisia kuin nanogrammat millilitrassa).

testin ensimmäinen vaihe on lateksihiukkasen liittäminen yhteen vasta-ainemolekyyleillä, jotka kiinnittyvät erityisesti hiukkasten pinnalla oleviin antigeenisiin taustatekijöihin. On muodostumista suuria ristikoita kautta nämä rajat linkkejä ja nämä suuret Ristikot sedimentin helposti johtuu suuresta koosta möhkäleitä ja näkyvät paljaalla silmällä muutamassa minuutissa. Agglutinaatioaste voidaan määrittää piirtämällä aggutinantti konsentraatio, joka antaa kellon muotoinen käyrä. Antigeeni-vasta-ainekompleksit voidaan suurentaa lateksihiukkasten avulla. Monet lateksiagglutinaatiotestit suoritetaan manuaalisesti ja havaitaan silmämääräisesti. Agglutinaation määrittämiseksi on oltava noin 100 möhkälettä, ja näiden möhkäleiden on oltava kooltaan noin 50 mikrometriä, jotta ne voidaan nähdä silmin.

agglutinaation Estoreaktiot

jos vasta-ainetta inkuboidaan antigeenillä ennen lateksiin sekoittamista, agglutinaatio estyy; tämä johtuu siitä, että agglutinaatioon ei ole vapaita vasta-aineita. Agglutinaatio-inhibitiossa agglutinaation puuttuminen on antigeenin diagnostinen ominaisuus, joka antaa erittäin herkän määrityksen pienille määrille antigeenia. Esimerkiksi koti raskaus sarjat sisältävät ihmisen koriongonadotropiini (HCG hormoni) päällystetty lateksihiukkanen ja vasta HCG. Raskaana olevan naisen virtsa sisältää HCG: tä, jota kehittyvä istukka erittää hedelmöityksen jälkeen. HCG: tä sisältävän virtsan lisääminen estää lateksihiukkasten agglutinaatiota, kun anti-HCG-vasta-ainetta lisätään; ja siten raskaus osoittaa agglutinaation puuttumisen.

Lateksipartikkelit

Emulsiopolymerointi on menetelmä, jota käytetään lateksipartikkelien valmistukseen. Ensinnäkin styreeni sekoitetaan pinta-aktiiviseen (natriumdodekyylisulfaatti) liuokseen, muodostaa miljardeja emulgoituja misellejä, jotka ovat halkaisijaltaan yhtenäisiä. Sitten siihen lisätään pieni määrä kaliumpersulfaattia, joka on vesiliukoinen polymeroinnin initiaattori. Kun polymerointiprosessi on valmis, polystyreeniketjut on järjestetty miselleihin. Polystyreeniketjun hiilivetyosa kiinnittyy keskipisteeseen ja terminaalinen sulfaatti-ioni vesifaasille altistuvaan pallojen pintaan. Myös muita hiilivetyjä ja sen johdannaisia käytetään yhtenäisten lateksihiukkasten valmistukseen, joitakin esimerkkejä ovat stryreeni-dlvinyylibentseeni, Polymetyylimetakrylaatti, styreenivinyylitolueeni, polyvinyylitolueeni jne.

lateksihiukkasten valmistusprosessi on kehittynyt synteettisen kumin valmistuksesta ja myös emulsio on maitomainen, sille on annettu termi lateksi .Lateksihiukkasen haluttu halkaisija voidaan tehdä muokkaamalla valmistusprosessia, hiilivetyjä, pinta-aktiivisia aineita ja initiaattoria. Lateksien hiukkaskoko vaihtelee yleensä välillä 0,05 µm-2µm. Koska hiukkasen pinnalla on sulfaatti-ja sulfonaatti-ioneja, jotka tuottavat hiukkaselle luonnostaan negatiivisen pintavarauksen.

lateksihiukkaset voidaan funktionalisoida ja pintakäsitellä sitoutumisstabiiliuden helpottamiseksi ja analyytin kiinnittymisen lisäämiseksi. Funktionaalisia hoitoja, kuten amidaatiota, aminaatiota, karboksylaatiota, hydroksylaatiota ja jopa magnetointia käytetään lateksihiukkasten ominaisuuksien lisäämiseen. Myös erivärisiä lateksipartikkeleita on saatavilla kaupallisesti, mikä helpottaa visuaalista lukemista.

lateksiagglutinaatiotesti on kliininen menetelmä tiettyjen antigeenien tai vasta-aineiden osoittamiseksi erilaisissa kehon nesteissä, kuten veressä, syljessä, virtsassa tai aivo-selkäydinnesteessä. Testattava näyte lähetetään laboratorioon, jossa se sekoitetaan tietyllä antigeenillä tai vasta-aineella päällystettyihin lateksihelmiin. Lateksihelmien paakkuuntuminen (agglutinaatio) osoittaa epäiltyjen hiukkasten läsnäolon.

Lateksiagglutinaatiotesti sisältää joitakin etuja .Ne ovat,

1. Kyky saada semi kvantitatiivisia tuloksia.
2. Pienet yksittäiset testikustannukset.
3. Suhteellisen lyhyt aika saada tuloksia.

suorittamalla näytteiden 2-10-kertaisia laimennoksia saadaan semikvantitatiiviset tulokset .Latex agglutinaatiotestillä on joitakin haittoja, joita ovat myös

1.On tulkittava huolellisesti marginaalisia tuloksia ja
2. Spesifisyyden ongelmat, jotka johtuvat häiritsevistä aineista monissa määrityksissä.