Coloration TUNEL et test TUNEL
Gao Y et coll. kit de dosage HRP-DAB TUNEL ab206386 utilisé pour analyser des coupes de tissus d’ovaires de souris. a. Section traitée avec de la DNase I comme témoin positif. b. Contrôle négatif sans enzyme TdT. c et f. images expérimentales représentatives. Les noyaux colorés avec le test TUNEL sont bruns. Les sections ont été contre-colorées avec du vert méthylique.
Avantages et inconvénients des méthodes de coloration TUNEL
Les protocoles de coloration TUNEL / dosage TUNEL qui utilisent un nucléotide directement marqué avec un colorant fluorescent sont plus rapides que les méthodes indirectes, qui utilisent soit un anticorps, soit un complexe streptavidine-biotine, car ils nécessitent moins d’étapes de coloration.
Les méthodes qui reposent sur des nucléotides marqués à la biotine peuvent bénéficier de l’amplification du complexe streptavidine-biotine. Ils nécessitent des étapes de blocage supplémentaires pour neutraliser la biotine endogène et réduire la coloration de fond, bien que celles-ci soient communes à tous les chercheurs utilisant l’immunohistochimie chromogène traditionnelle.
Les méthodes à base de BrdU peuvent également produire un signal plus lumineux car la BrdU est généralement plus facilement incorporée par l’enzyme TdT.
La popularité relative de la coloration TUNEL / des méthodes de dosage TUNEL
Une enquête sur 50 articles de recherche publiés en 2017 contenant le terme « Dosage TUNEL » ou « Coloration TUNEL », a révélé que:
– 50% des papiers utilisaient du dUTP directement conjugué au FITC
– 15% utilisaient de la biotine-dUTP et de la streptavidine-HRP
– 15% utilisaient du FITC-dUTP et un anticorps anti-FITC conjugué au HRP
– 12% utilisaient de la digoxygénine-dUTP, et un anticorps anti-digoxygénine conjugué à un colorant fluorescent ou au HRP
– 8% ont utilisé du Br-dUTP et un anticorps anti-BrdU conjugué à un colorant fluorescent
Tous les articles étudiés ont utilisé le test TUNEL en imagerie plutôt qu’en cytométrie en flux. Là où le HRP a été utilisé, un substrat de tampographie a été ajouté pour créer une tache brune. Plus de 90% des articles de recherche utilisaient un kit pour la coloration TUNEL.