Giemsa Stain-Principle, Procedure, Results, Interpretation

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Dernière Mise à jour le 5 février 2020 par Sagar Aryal

Introduction

La tache de Giemsa était un nom adopté par un chimiste allemand, pour son application d’une combinaison de réactifs pour démontrer la présence de parasites dans le paludisme.

Il appartient à un groupe de taches connues sous le nom de taches Romanowsky. Ce sont des taches neutres composées d’un mélange de bleu de méthylène oxydé, d’azur et d’Éosine Y et elles ont été réalisées sur une lame séchée à l’air et post-fixée avec du méthanol. Les taches de Romanowsky sont appliquées dans la différenciation des cellules, les examens pathologiques d’échantillons tels que des films de sang et de moelle osseuse et la démonstration de parasites, par exemple le paludisme. Il existe quatre types de taches Romanoswsky:

  • Teinture Giemsa
  • Teinture Jenner
  • Teinture Wright
  • Teinture May-Grunwald
  • Teinture Leishman

Objectifs de la teinture Giemsa

  • Pour préparer avec précision la solution mère de teinture de Giemsa
  • Pour colorer et identifier les cellules sanguines
  • Pour différencier les noyaux de cellules sanguines du cytoplasme

Principe

La teinture Giemsa est une technique de coloration de référence utilisée pour les frottis fins et épais afin d’examiner le sang à la recherche de parasites du paludisme, un contrôle de routine pour d’autres parasites sanguins et de différencier morphologiquement le nucléaire et le cytoplasme des érythrocytes, des leucocytes et des plaquettes et des parasites.

Comme tout type de teinture Romanowsky, il se compose à la fois des colorants Acides et basiques, en relation avec les affinités d’acidité et de basicité pour les cellules sanguines. Bleu azur et bleu de méthylène, un colorant basique se lie au noyau acide produisant une couleur bleu-violet. L’éosine est un colorant acide qui est attiré par le cytoplasme et les granules cytoplasmiques qui produisent une coloration rouge alcaline. La tache doit être tamponnée avec de l’eau à pH 6,8 ou 7.2, pour précipiter les colorants pour lier des matériaux simples.

Classiquement, la teinture de Giemsa est une teinture différentielle composée d’une combinaison de réactifs (bleu azur, bleu de méthylène et colorant à éosine) largement utilisés en cytogénétique et en histopathologie pour le diagnostic de:

  1. Paludisme, spirochètes et autres parasites du sang
  2. Corps d’inclusion de Chlamydia trachomatis
  3. Borrelia spp
  4. Yersinia pestis
  5. Histoplasma spp
  6. Kystes de Pneumocystis jiroveci

Réactifs utilisés

  • Méthanol
  • Poudre de Giemsa
  • Glycérine
  • Eau (Tampon)

Procédure

Préparation de la solution Stock de teinture Giemsa (500ml)

  1. Dans 250 ml de méthanol, ajouter 3,8 g de poudre de Giemsa et dissoudre.
  2. Chauffer la solution jusqu’à ~ 60oC
  3. Puis ajouter 250ml de glycérine à la solution, lentement.
  4. Filtrer la solution et laisser reposer environ 1 à 2 mois avant utilisation.

Préparation de la solution de travail

  1. Ajouter 10 ml de solution mère à 80 ml d’eau distillée et 10 ml de méthanol

Procédure de coloration 1: Coloration en couche mince

  1. Sur une lame de verre microscopique propre et sèche, faire un film mince de l’échantillon (sang) et laisser sécher à l’air.
  2. trempez le frottis (2-3 trempettes) dans du méthanol pur pour la fixation du frottis, laissez sécher à l’air pendant 30 secondes
  3. Inondez la lame avec une solution de teinture Giemsa à 5% pendant 20-30 minutes.
  4. Rincer à l’eau du robinet et laisser sécher

REMARQUE: En cas d’urgence, laisser la solution de teinture Giemsa pendant 5 à 10 minutes

Procédure de coloration 2: Coloration en couche épaisse

  1. Ajouter un frottis de sang épais et sécher à l’air pendant 1 heure sur une grille de coloration.
  2. Trempez le frottis sanguin épais dans une tache de Giemsa diluée (préparée en prenant 1 ml de solution mère et en ajoutant 49 ml de tampon phosphate ou d’eau distillée, mais les résultats peuvent varier différemment).
  3. Laver le frottis en le plongeant dans de l’eau tamponnée d’eau distillée pendant 3 à 5 minutes
  4. Laisser sécher

Résultats

Le cytoplasme et les granules cytoplasmiques des cellules sanguines apparaissent de couleur rouge tandis que le noyau apparaît de couleur bleu-violet.

Les érythrocytes apparaîtront roses dans clour

  • Les éosinophiles auront un noyau bleu-violet, un cytoplasme rose pâle et des granules rouge orangé.
  • Les neutrophiles apparaîtront avec un noyau rouge violet et un cytoplasme rose.
  • Les basophiles auront un noyau violet et des granules bleutés.
  • Les lymphocytes ont un noyau bleu foncé et un cytoplasme bleu clair.
  • Les monocytes auront un noyau violet et un cytoplasme rose.
  • Les plaquettes auront des granules violets.

Teinture Giemsa - Principe, Procédure, Résultats, Interprétation

Source de l’image: Wikipedia

Interprétation

Bleu azur et bleu de méthylène, un colorant basique se lie au noyau acide produisant une couleur bleu-violet. L’éosine est un colorant acide qui est attiré par le cytoplasme et les granules cytoplasmiques qui produisent une coloration rouge-orange alcaline.

Applications Tache de Giemsa

  1. La tache de Giemsa est spécifique pour les groupes phosphate de l’ADN. Il se fixe aux régions de l’ADN avec de grandes quantités de liaison adénine-thymine.
  2. La teinture de Giemsa est utilisée dans les bandes de Giemsa (bandes G), pour colorer les chromosomes et elle est souvent utilisée pour créer une représentation schématique des chromosomes (idiogramme).
  3. Étant une tache différentielle, la tache de Giemsa peut être utilisée pour étudier l’adhérence des bactéries pathogènes aux cellules humaines, différenciant les cellules humaines en violet et les cellules bactériennes en rose.
  4. Il peut être utilisé pour le diagnostic histopathologique du paludisme et de certains parasites sanguins spirochètes et protozoaires.
  5. Il est également utilisé dans la teinture tissulaire de Wolbach i.e coloration du tissu hématopoïétique et pour l’identification des bactéries et des rickettsies
  6. La tache de Giemsa est une tache de film sanguin classique pour les frottis de sang périphérique et les échantillons de moelle osseuse. Les globules rouges colorent le rose, les plaquettes colorent un rose pâle clair, le cytoplasme des lymphocytes tache le bleu ciel, le cytoplasme des monocytes tache le bleu pâle et la chromatine nucléaire des leucocytes tache le magenta.
  7. La teinture de Giemsa est également utilisée pour visualiser les chromosomes, en identifiant les anomalies chromosomiques telles que la translocation et le réarrangement,
  8. La teinture de Giemsa colore l’histoplasme du champignon, la bactérie Chlamydia, et peut être utilisée pour identifier les mastocytes.

Avantages

  • Facilement disponibles, faciles à préparer, à entretenir et à utiliser

Limitations

  • La teinture de travail Giemsa doit être préparée peu de temps avant utilisation.
  1. Techniques de coloration : Giemsa par Kathleen P Freeman, Karen L Gerber : Vetstream
  2. Paramedic World; Techniques d’hématologie / Technique de coloration Giemsa
  3. Comment fonctionnent les taches Romanowsky et pourquoi elles restent précieuses – y compris un mécanisme de coloration Romanowsky universel proposé et un schéma de dépannage rationnel par Horobin RW./ncbi.nlm.nih.gov

Sources Internet

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK