Northern blot

Un northernblot est une méthode de laboratoire utilisée pour détecter des molécules d’ARN spécifiques parmi un mélange d’ARN. Le Northern blot peut être utilisé pour analyser un échantillon d’ARN provenant d’un tissu ou d’un type cellulaire aparticulaire afin de mesurer l’expression de l’ARN de gènes particulaires. Cette méthode a été nommée pour sa similitude avec la techniqueconnu comme une tache du Sud.

La première étape d’un northern blot consiste à dénaturer ou à séparer l’ARN contenu dans l’échantillon en brins simples, ce qui garantit que les brins sont dépliés et qu’il n’y a pas de liaison entre les brins. Les molécules d’ARN sont ensuite séparéesen fonction de leurs tailles à l’aide d’une méthode appelée électrophorèse sur gel. Après la séparation, l’ARN est transféré du gel sur une membrane buvard.(Bien que cette étape soit ce qui donne à la technique le nom de « northern blot », le terme est généralement utilisé pour décrire l’ensemble de la procédure.) Une fois le transfert terminé, la membrane buvard porte toutes les bandes d’ARN à l’origine sur le gel. Ensuite, la membrane est traitée avec un petit morceau d’ADN ou d’ARN appelé sonde, qui a été conçue pour avoir une séquence complémentaire de la séquence d’ARN aparticulaire dans l’échantillon; cela permet à la sonde de s’hybrider, ou de se lier, à un fragment d’ARN spécifique sur la membrane. De plus, la sonde contient de l’albâtre, qui est généralement un atome radioactif ou un colorant fluorescent. Ainsi, après hybridation, la sonde permet de détecter la molécule d’ARN d’intérêt parmi les nombreuses molécules d’ARN différentes de la membrane.