Giemsa plet-princip, Procedure, resultater, fortolkning

BY admin
|
Biologi pædagogiske videoer

sidst opdateret den 5. februar 2020 af Sagar Aryal

introduktion

Giemsa stain var et navn, der blev vedtaget fra en tysk kemikerforsker, for hans anvendelse af en kombination af reagenser til at demonstrere tilstedeværelsen af parasitter i malaria.

det tilhører en gruppe af pletter kendt som Romanovsky pletter. Disse er neutrale pletter, der består af en blanding af iltet methylenblåt, blåt og Eosin Y, og de udføres på et lufttørret objektglas, der er fastgjort med methanol. Pletter anvendes i differentiering af celler, patologiske undersøgelser af prøver som blod og knoglemarv film og demonstration af parasitter f.eks malaria. Der er fire typer Romanovsky pletter:

  • Giemsa stain
  • Jenner Stain
  • Bright stain
  • Maj-Grunvald Stain
  • Leishman stain

mål for Giemsa stain

  • for nøjagtigt at forberede Giemsa-stain-stamopløsningen
  • for at plette og identificere blodlegemer
  • for at differentiere blodcellekerner fra cytoplasmaet

princip

Giemsa-plet er en guldstandardfarvningsteknik, der bruges til både tynde og tykke udstrygninger til at undersøge blod for malariaparasitter, en rutinemæssig kontrol for andre blodparasitter og morfologisk differentiere den nukleare og cytoplasma af erythrocytter, leukocytter og blodplader og parasitter.

som enhver form for Romanovsky-pletter består den af både de sure og basiske farvestoffer i forhold til tilhørsforhold til surhed og basicitet for blodceller. Blå og methylenblåt, et basisk farvestof binder til syrekernen, der producerer blå-lilla farve. Eosin er et surt farvestof, der tiltrækkes af cytoplasma og cytoplasmatiske granuler, som er alkalisk producerende rød farve. Pletten skal bufres med vand til pH 6,8 eller 7.2, for at udfælde farvestofferne for at binde enkle materialer.

klassisk er Giemsa-pletten en differentieret plet, der består af en kombination af reagenser (blåt, methylenblåt og eosin-farvestof), der anvendes bredt i cytogenetik og histopatologi til diagnose af:

  1. Malaria, spirocheter og andre blodparasitter
  2. Chlamydia trachomatis inklusionslegemer
  3. Borrelia spp
  4. Histoplasma spp
  5. Pneumocystis jiroveci cyster

anvendte reagenser

  • Methanol
  • Giemsa pulver
  • Glycerin
  • vand (Buffer)

sagsforløb

fremstilling af Giemsa Stain stamopløsning (500 ml)

  1. i 250 ml methanol tilsættes 3,8 g Giemsa-pulver og opløses.
  2. opvarm opløsningen op til ~60oC
  3. tilsæt derefter 250 ml glycerin langsomt til opløsningen.
  4. Filtrer opløsningen og lad den stå i ca.1-2 måneder før brug.

forberedelse af arbejdsopløsning

  1. tilsæt 10 ml stamopløsning til 80 ml destilleret vand og 10 ml methanol

farvningsprocedure 1: Tyndfilmfarvning

  1. lav en tynd film af prøven (blod) på en ren, tør mikroskopisk glasrutschebane og lad den lufttørre.
  2. dyp smøret (2-3 dips) i ren methanol til fastgørelse af smøret, lad det lufttørre i 30 sekunder
  3. oversvøm objektglasset med 5% Giemsa-pletopløsning i 20-30 minutter.
  4. skyl med ledningsvand og lad det tørre

BEMÆRK: I tilfælde af nødsituationer skal du lade Giemsa-pletopløsningen stå i 5-10 minutter

farvningsprocedure 2: farvning af tyk Film

  1. tilsæt en tyk udstrygning af blod og lufttørre i 1 time på et farvestativ.
  2. dyp det tykke blodudstrygning i fortyndet Giemsa-plet (fremstillet ved at tage 1 ml stamopløsningen og tilsætte til 49 ml fosfatbuffer eller destilleret vand, men resultaterne kan variere forskelligt).
  3. vask smøret ved at dyppe i bufret vand af destilleret vand i 3-5 minutter
  4. lad det tørre

resultater

cytoplasma og cytoplasmatiske granuler af blodceller ser røde ud, mens kernen ser blå-lilla ud.

erythrocytterne vises lyserøde i clour

  • Eosinophils vil have en blå-lilla kerne, en lyserød cytoplasma og orange-røde granuler.
  • neutrofiler vises lilla-rød kerne og en lyserød cytoplasma.
  • basofiler vil have en lilla kerne og blålige granulater.
  • lymfocytter har en mørkeblå kerne og en lyseblå cytoplasma.
  • monocytter vil have en lilla kerne og en lyserød cytoplasma.
  • blodplader vil have lilla granulater.

Giemsa Stain-princip, Procedure, resultater, fortolkning

Billedkilde: Vipipedia

fortolkning

blå og methylenblåt, et basisk farvestof binder til syrekernen, der producerer blå-lilla farve. Eosin er et surt farvestof, der tiltrækkes af cytoplasma og cytoplasmatiske granuler, som er alkalisk producerende rød-orange farve.

applikationer Giemsa plet

  1. Giemsa plet er specifik for fosfat grupper af DNA. Det binder sig til regioner af DNA med store mængder adenin-thyminbinding.
  2. Giemsa-plet bruges i Giemsa-banding (G-banding) til at plette kromosomer, og det bruges ofte til at skabe en diagrammatisk repræsentation af kromosomer (idiogram).
  3. at være en differentieret plet kan Giemsa-plet bruges til at undersøge vedhæftningen af patogene bakterier til humane celler, der differentierer humane celler som lilla og bakterieceller som lyserøde.
  4. det kan bruges til histopatologisk diagnose af malaria og nogle spirochete og protosoiske blodparasitter.
  5. det bruges også i Ulbachs vævsplet i.e farvning hæmatopoietisk væv og til identifikation af bakterier og rickettsia
  6. Giemsa-plet er en klassisk blodfilmfarve til perifert blodudstrygning og knoglemarvsprøver. Røde blodlegemer pletter lyserøde, blodplader pletter en lys lyserød, lymfocytcytoplasma pletter himmelblå, monocytcytoplasma pletter lyseblå og leukocytkromatinpletter magenta.
  7. Giemsa-plet bruges også til at visualisere kromosomer, identificere kromosomale anomalier som translokation og omlejring,
  8. Giemsa pletter svampen Histoplasma, Klamydiabakterier og kan bruges til at identificere mastceller.

fordele

  • let tilgængelig, let at forberede, vedligeholde og bruge

begrænsninger

  • arbejder Giemsa plet skal fremstilles kort før brug.
  1. farvningsteknikker: Giemsa af Kathleen P Freeman, Karen L Gerber: Vetstream
  2. paramedicinsk verden; Hematology Practicals / Giemsa farvningsteknik
  3. hvordan Romanovsky-pletter fungerer, og hvorfor de forbliver værdifulde-inklusive en foreslået universel Romanovsky-farvningsmekanisme og en rationel fejlfindingsplan af Horobin RV. / ncbi.NLM.nih. gov

internetkilder

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK