célkitűzés

a latex agglutináció technikájának megtanulása.

Latex agglutináció figyelhető meg, amikor a specifikus antigént (vagy antitestet) tartalmazó mintát olyan antitesttel (vagy antigénnel) keverik össze, amely a latex részecskék felületén van bevonva.

Latex agglutinációs teszteket alkalmaztak klinikai laboratóriumokban fertőző betegségek kimutatására, és 1956-ban Singer és Plotz először leírták a reumatoid faktor tesztet, amely latex agglutináción alapul. Rheumatoid arthritisben (RA) a szinoviális ízületben a limfociták által termelt IgG antitestek reagálnak az IgM antitestekkel (RF, rheumatoid faktor), hogy immunkomplexeket hozzanak létre, amelyek aktiválják a komplementet és a szövetek pusztulását okozzák. Az RA diagnosztikai jelentőségű.

azóta a mikrobiális és vírusos fertőzések, autoimmun betegségek, hormonok, gyógyszerek és szérumfehérjék kimutatására szolgáló teszteket világszerte számos vállalat fejlesztette ki és forgalmazza. Az elvet számos fertőzés diagnosztizálására használják, például Hepatitis B, H. influenzae, N. meningitidis stb.. Az antigén vagy antitest kimutatására vagy mennyiségi meghatározására szolgáló összes módszer kihasználja azt a tényt, hogy komplexet képeznek. Az optimális antigén-antitest koncentrációban ez a komplex kicsapódik. Ha azonban az antigén részecske jellegű, az antigén-antitest komplex agglutinációját figyeljük meg.

agglutinációs reakciók

a részecske antigén és az antitest közötti reakció látható összetapadást, úgynevezett agglutinációt eredményez. Az ilyen reakciókat kiváltó antitesteket agglutinineknek nevezzük. Az agglutinációs reakciók elve hasonló a csapadékreakciókhoz, ezek a többértékű antigének keresztkötésétől függenek. Ha az antigén eritrocita, akkor hemagglutinációnak nevezik.Elméletileg minden antitest agglutinálhatja a részecske antigéneket, de az IgM magas specifitása miatt különösen jó agglutinin.

nem figyelhető meg agglutináció, ha az antitest koncentrációja magas (alacsonyabb hígítások), majd a mintát hígítjuk, agglutináció következik be. A Prozone hatás az agglutináció láthatatlansága az antitestek magas koncentrációiban. Ennek oka az, hogy a felesleges antitest nagyon apró komplexeket képez, amelyek nem csomóznak össze, hogy látható agglutinációt képezzenek.

kvalitatív agglutinációs teszt

az agglutinációs tesztek kvalitatív módon alkalmazhatók antigén vagy antitest jelenlétének meghatározására. Az antitestet összekeverik a részecske antigénnel, és a pozitív tesztet a részecske antigén agglutinációja jelzi.

például a beteg vércsoportjának meghatározásához a személy vörösvérsejtjei keverhetők egy vércsoport antigén elleni antitesttel. Egy másik példa az, hogy az antitestek jelenlétének vizsgálatához egy betegmintában a beteg szérumát összekeverjük egy ismert vércsoport vörösvérsejtjével (RBC).

kvantitatív agglutinációs teszt

a részecske antigének elleni antitestek szintjének mérésére az agglutinációs teszt széles körben alkalmazható. Ehhez a vizsgálathoz a mintából sorozatos hígításokat lehet végezni, és antitest-vizsgálatot kell végezni. Ezután rögzített mennyiségű részecske antigént vagy baktériumot vagy vörösvértestet adhatunk hozzá. Határozzuk meg azt a maximális hígítást, amely agglutinációt eredményez, és ezt a maximális hígítást, amely megfigyelhető agglutinációt eredményez, titernek nevezzük. Az eredményeket a látható agglutinációt képező maximális hígítás reciprokaként mutatjuk be.

passzív hemagglutináció

az agglutinációs reakciók érzékenysége és egyszerűsége kiterjeszthető az oldható antigénekre a passzív hemagglutináció technikájával. Ebben a technikában az antigénnel bevont vörösvértesteket úgy állítjuk elő, hogy egy oldható antigént összekeverünk egy csersavval vagy króm-kloriddal kezelt vörösvértestekkel, amelyek mindkettő elősegíti az antigén adszorpcióját a sejtek felületére. Az eritrocitákat azonban oldható antigénnel (pl.. vírusantigén, poliszacharid vagy haptén), és a bevont vörösvérsejteket az oldható antigén ellenanyagának agglutinációs tesztjében kell felhasználni.

sorozatosan hígított szérumot, amely antitestet tartalmaz, a mikrotiterlemez minden egyes lyukába betöltjük, majd ezt követően antigénnel bevont vörösvértesteket viszünk fel minden egyes lyukba. Az agglutinált vörösvértestek jellegzetes mintázatát a kutakon eszközként használják az agglutinációs reakciók vizsgálatára. Ha az antigén szemcsés, akkor az antigén reagálhat a szérumban lévő antitesttel, és az antigén összetapadását eredményezi, ami pozitív eredményt mutat.

az elmúlt néhány évben eltolódott a vörösvértestektől a szintetikus részecskékig, például a latex gyöngyökig. A készítmény azonnal felhasználható, vagy későbbi felhasználás céljából tárolható. A szintetikus gyöngyök használata a konzisztencia, az egységesség és a stabilitás előnyeit kínálja. Ezenkívül a szintetikus gyöngyöket alkalmazó agglutinációs reakciók gyorsan leolvashatók, gyakran a gyöngyöknek a vizsgálati mintával való összekeverésétől számított 3-5 percen belül. Akár vörösvérsejteken, akár a kényelmesebb és sokoldalúbb szintetikus gyöngyökön alapul, az agglutinációs reakciók egyszerűek, nem igényelnek drága berendezéseket, és kis mennyiségű antitestet észlelnek ( olyan koncentrációk, mint nanogramm / milliliter).

a vizsgálat kezdeti lépése a latex részecske összekapcsolása az antitestmolekulákkal, amelyek specifikusan kapcsolódnak a részecskék felületén lévő antigén determinánsokhoz. Ezeken a keresztkötéseken keresztül nagy rácsok képződnek, és ezek a nagy rácsok könnyen üledékesek a csomók nagy mérete miatt, és perceken belül szabad szemmel láthatók. Az agglutináció mértéke meghatározható az aggutináns koncentráció ábrázolásával, amely harang alakú görbét ad. Az antigén-antitest komplexek a latex részecskék segítségével nagyíthatók. A latex agglutinációs tesztek nagy részét manuálisan végzik, és vizuális megfigyeléssel detektálják. Az agglutináció meghatározásához körülbelül 100 csomónak kell lennie, és ezeknek a csomóknak körülbelül 50 mikrométer nagyságúnak kell lenniük, hogy szemmel láthatók legyenek.

agglutinációs gátlási reakciók

ha az antitestet antigénnel inkubáljuk a latexszel való keverés előtt, az agglutináció gátolt; ez azért van, mert az agglutinációhoz nem állnak rendelkezésre szabad antitestek. Az agglutináció gátlásában az agglutináció hiánya az antigén diagnosztikája, nagy érzékenységű vizsgálatot biztosít kis mennyiségű antigénre. Például otthoni terhesség készletek tartalmaznak humán chorion gonadotropin (HCG hormon) bevont latex részecske és antitest HCG. A terhes nő vizelet HCG-t tartalmaz, amelyet a fejlődő placenta választ ki a megtermékenyítés után. A HCG-t tartalmazó vizelet hozzáadása gátolja a latex részecskék agglutinációját, amikor az anti-HCG antitestet hozzáadják; így a terhességet az agglutináció hiánya jelzi.

a

Latex részecskék emulziós polimerizációja az az eljárás, amelyet latexrészecskék előállítására alkalmaznak. Először a sztirolt összekeverjük a felületaktív anyaggal (nátrium-dodecil-szulfát) oldat, milliárd emulgeált micellát képez, amelyek egyenletes átmérőjűek. Ezután kis mennyiségű kálium-perszulfátot adunk hozzá, amely vízben oldódó polimerizációs iniciátor. Amikor a polimerizációs folyamat befejeződött, a polisztirol láncok a micellákba vannak elrendezve. A polisztirollánc szénhidrogén része a középponthoz, a terminális szulfátion pedig a gömbfelülethez kapcsolódik, amely a vízfázisnak van kitéve. Az egyenletes latexrészecskék előállításához más szénhidrogéneket és származékait is használnak, ilyenek például a sztrirén-dlvinil-benzol, polimetil-metakrilát, sztirol-vinil-toluol, polivinil-toluol stb.

a folyamat a latex részecske termelés alakult ki a szintetikus gumi termelés és az emulzió van egy tejszerű megjelenés, a kifejezés latex adják meg .A latexrészecske kívánt átmérője előállítható az előállítási folyamat, a szénhidrogének, a felületaktív anyagok és az iniciátor módosításával. A latexek részecskemérete általában 0,05-2 6-2 között mozog. A szulfát és a szulfonát ionok jelenléte miatt a részecske felületén, amely a részecske természetes negatív felületi töltését biztosítja.

a latex részecskék funkcionalizálhatók és felületkezelhetők a kötési stabilitás megkönnyítése és az analit kötődésének növelése érdekében. Funkcionális kezeléseket, például amidációt, aminálást, karboxilezést, hidroxilezést, sőt mágnesezést alkalmaznak a latex részecskék tulajdonságainak növelésére. A latex részecskék különböző színei is kereskedelmi forgalomban kaphatók, amelyek megkönnyítik a vizuális leolvasást.

a latex agglutinációs teszt klinikai módszer bizonyos antigének vagy antitestek kimutatására különféle testfolyadékokban, például vérben, nyálban, vizeletben vagy cerebrospinális folyadékban. A vizsgálandó mintát elküldik a laboratóriumba, ahol összekeverik egy specifikus antigénnel vagy antitesttel bevont latex gyöngyökkel. A latex gyöngyök csomósodása (agglutináció) a feltételezett részecskék jelenlétét jelzi.

a Latex agglutinációs teszt néhány előnyt tartalmaz .Ezek,

1. Félig kvantitatív eredmények megszerzésének képessége.
2. Alacsony egyéni tesztköltség.
3. Viszonylag rövid idő az eredmények eléréséhez.

a minták 2-10 – szeres hígításával megkaphatjuk a félkvantitatív eredményeket .Latex agglutinációs teszt van néhány hátránya is, amelyek a következők

1.Gondosan kell értelmezni a marginális eredményeket és
2. Problémák a specifitással a zavaró anyagok miatt sok vizsgálatban.