Giemsa folt-elv, eljárás, eredmények, értelmezés

BY admin
|
Biológia oktatási videók

utoljára 5. február 2020-án frissítette: Sagar Aryal

Bevezetés

a Giemsa-folt egy német kémikus tudós által elfogadott név volt, reagensek kombinációjának alkalmazására a paraziták maláriában való jelenlétének bizonyítására.

a Romanowsky foltok néven ismert foltok csoportjába tartozik. Ezek semleges foltok, amelyek oxidált metilénkék, azúrkék és eozin y keverékéből állnak, és egy levegőn szárított tárgylemezen hajtják végre, amelyet metanollal rögzítenek. A Romanowsky foltokat a sejtek differenciálódására, a minták, például a vér-és csontvelőfilmek patológiás vizsgálatára, valamint a paraziták, például a malária kimutatására alkalmazzák. A Romanoswsky foltok négy típusa létezik:

  • Giemsa folt
  • Jenner folt
  • Wright folt
  • május-Grunwald folt
  • Leishman folt

a Giemsa folt célkitűzései

  • a Giemsa foltoldat pontos előkészítése
  • vérsejtek festése és azonosítása
  • a vérsejtek sejtmagjainak a citoplazmától való megkülönböztetése

elv

a Giemsa folt egy arany standard festési technika, amelyet mind vékony, mind vastag kenetekhez használnak a vér malária paraziták vizsgálatára, rutinszerű ellenőrzés a más vér paraziták és morfológiailag megkülönböztetni a nukleáris és citoplazma eritrociták, leukociták és vérlemezkék és paraziták.

mint minden típusú Romanowsky foltok, ez áll mind a savas és bázikus színezékek, kapcsolatban affinitása savasság és bázikus vérsejtek. Azúrkék és metilénkék, egy bázikus festék kötődik a savmaghoz, amely kék-lila színt eredményez. Az eozin egy savas festék, amely vonzza a citoplazmát és a citoplazmatikus granulátumokat, amelyek lúgos vörös színt eredményeznek. A foltot vízzel 6,8 vagy 7 pH-ra kell pufferolni.2, kicsapjuk a színezékek kötődnek egyszerű anyagok.

klasszikusan a Giemsa folt egy differenciális folt, amely reagensek (azúrkék, metilénkék és eozin festék) kombinációjából áll, amelyeket széles körben használnak a citogenetikában és a hisztopatológiában a:

  1. malária, spirochetes és más vérparaziták
  2. Chlamydia trachomatis befogadási szervek
  3. Borrelia spp
  4. Yersinia pestis
  5. Histoplasma spp
  6. Pneumocystis jiroveci ciszták

felhasznált reagensek

  • metanol
  • Giemsa por
  • glicerin
  • víz (puffer)

eljárás

a Giemsa folt Alapoldat elkészítése (500 ml)

  1. 250 ml metanolba adjunk hozzá 3,8 g Giemsa Port és oldjuk fel.
  2. melegítsük fel az oldatot ~60oc
  3. majd lassan adjunk hozzá 250 ml glicerint az oldathoz.
  4. szűrjük le az oldatot, és hagyjuk állni 1-2 hónapig használat előtt.

munkaoldat elkészítése

  1. adjunk hozzá 10 ml törzsoldatot 80 ml desztillált vízhez és 10 ml metanolhoz

festési eljárás 1: vékonyréteg festés

  1. egy tiszta, száraz mikroszkopikus üveglemezen készítsen egy vékony filmet a mintáról (vér), majd hagyja megszáradni.
  2. mártsa a kenetet (2-3 mártás) tiszta metanolba a kenet rögzítéséhez, hagyja levegőn száradni 30 másodpercig
  3. öntse a diát 5% – os Giemsa foltoldattal 20-30 percig.
  4. csapvízzel öblítse le és hagyja megszáradni

megjegyzés: vészhelyzet esetén hagyja a Giemsa foltoldatot 5-10 percig

festési eljárás 2: vastag Filmfestés

  1. adjunk hozzá egy vastag kenetet a vérből, majd 1 órán át szárítsuk meg a festőállványon.
  2. mártsa a vastag vérkenetet hígított Giemsa-foltba (1 ml törzsoldat bevételével és 49 ml foszfátpuffer vagy desztillált víz hozzáadásával készítve, de az eredmények eltérőek lehetnek).
  3. mossa le a kenetet pufferelt desztillált vízbe mártva 3-5 percig
  4. hagyja megszáradni

eredmények

a vérsejtek citoplazmatikus szemcséi vörös színűek, míg a sejtmag kék-lila színűek.

az eritrociták rózsaszínűek lesznek a klór

  • az eozinofilek kék-lila maggal, halvány rózsaszínű citoplazmával és narancsvörös granulátummal rendelkeznek.
  • a neutrofilek lila-vörös mag és rózsaszín citoplazma jelennek meg.
  • a bazofilek lila maggal és kékes szemcsékkel rendelkeznek.
  • a limfocitáknak Sötétkék magja és világoskék citoplazmája van.
  • a monociták lila maggal és rózsaszín citoplazmával rendelkeznek.
  • a vérlemezkék lila granulátummal rendelkeznek.

Giemsa folt-elv, eljárás, eredmények, értelmezés

kép forrása: Wikipedia

értelmezés

azúrkék és metilénkék, egy alapfesték kötődik a savmaghoz, amely kék-lila színt hoz létre. Az eozin egy savas festék, amely vonzza a citoplazmát és a citoplazmatikus granulátumokat, amelyek lúgos vörös-narancssárga színűek.

Alkalmazások Giemsa folt

  1. a Giemsa folt specifikus a DNS foszfátcsoportjaira. A DNS nagy mennyiségű adenin-timin kötéssel rendelkező régióihoz kötődik.
  2. a Giemsa foltot a Giemsa sávozásban (G-sávozás) használják a kromoszómák festésére, és gyakran használják a kromoszómák diagrammatikus ábrázolásának (idiogram) létrehozására.
  3. mivel differenciális folt, a Giemsa folt felhasználható a patogén baktériumok emberi sejtekhez való tapadásának tanulmányozására, az emberi sejteket lila, a baktériumsejteket pedig rózsaszínűvé differenciálva.
  4. használható a malária és néhány spirochete és protozoon vérparaziták kórszövettani diagnosztizálására.
  5. azt is használják Wolbach szöveti folt i.a vérképző szövetek festése és a baktériumok és a rickettsia azonosítása
  6. a Giemsa folt klasszikus vérfilm folt perifériás vérkenetek és csontvelő minták számára. A vörösvértestek rózsaszínűek, a vérlemezkék világos halvány rózsaszínűek, a limfocita citoplazma égkék, a monocita citoplazma halványkék, a leukocita nukleáris kromatin pedig bíborvörös.
  7. a Giemsa foltot a kromoszómák megjelenítésére is használják, azonosítva a kromoszóma anomáliákat, például a transzlokációt és az átrendeződést,
  8. a Giemsa a gomba hisztoplazma, a Chlamydia baktériumok foltjait, és felhasználható a hízósejtek azonosítására.

előnyök

  • könnyen hozzáférhető, könnyen elkészíthető, karbantartható és használható

korlátozások

  • munka Giemsa foltot kell készíteni röviddel használat előtt.
  1. festési technikák: Giemsa Kathleen P Freeman, Karen l Gerber: Vetstream
  2. Mentős világ; Hematológiai gyakorlatok / Giemsa festési technika
  3. hogyan működnek a Romanowsky foltok és miért maradnak értékesek – beleértve a Horobin RW./ncbi.NLM.nih.Gov által javasolt univerzális Romanowsky festési mechanizmust és racionális hibaelhárítási sémát

internetes források

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK