Hybridoma technológia

a monoklonális antitestek alkalmazása számos, és magában foglalja a betegségek megelőzését, diagnosztizálását és kezelését. Például a monoklonális antitestek képesek megkülönböztetni a B-sejtek és a T-sejtek részhalmazait, ami hasznos a leukémia különböző típusainak azonosításában. Ezenkívül specifikus monoklonális antitesteket alkalmaztak a fehérvérsejtek és más sejttípusok sejtfelszíni markereinek meghatározására. Ez a markerek differenciálódási sorozatának klaszteréhez vezetett. Ezeket gyakran CD markereknek nevezik, és több száz különböző sejtfelszíni komponenst határoznak meg, amelyek mindegyikét egy adott monoklonális antitest kötése határozza meg. Az ilyen antitestek rendkívül hasznosak a fluoreszcencia-aktivált sejtválogatáshoz, bizonyos típusú sejtek specifikus izolálásához.

a diagnosztikai hisztopatológiábanszerkesztés

monoklonális antitestek segítségével a szöveteket és szerveket bizonyos meghatározott markerek kifejeződése alapján lehet osztályozni, amelyek tükrözik a szöveti vagy sejtes genezist. A prosztata-specifikus antigén, a placenta alkalikus foszfatáz, a humán koriongonadotropin, a Homo-fetoprotein és mások szervhez kapcsolódó antigének, és az ezen antigének elleni monoklonális antitestek termelése segít meghatározni az elsődleges daganat jellegét.

a monoklonális antitestek különösen hasznosak a morfológiailag hasonló elváltozások, például a pleurális és peritoneális mesothelioma, az adenokarcinóma megkülönböztetésében, valamint a differenciálatlan metasztázisok szervi vagy szöveti eredetének meghatározásában. A kiválasztott monoklonális antitestek elősegítik az okkult metasztázisok (ismeretlen elsődleges eredetű rák) kimutatását a csontvelő, más szöveti aspirátumok, valamint a nyirokcsomók és más szövetek immuno-citológiai elemzésével, és fokozott érzékenységet mutathatnak a normál hisztopatológiai festéssel szemben.

egy vizsgálat érzékeny immunhisztokémiai vizsgálatot végzett 20 lokalizált prosztatarákban szenvedő beteg csontvelő-aspirátumán. A vizsgálatban három monoklonális antitestet (T16, C26 és AE-1) alkalmaztak, amelyek képesek a hámsejtek által expresszált membrán-és citoszkeletális antigének felismerésére a tumorsejtek kimutatására. A lokalizált prosztatarákban szenvedő betegek 22%-ánál (B stádium, 0/5; C stádium, 2/4), valamint a metasztatikus prosztatarákban szenvedő betegek 36% – ánál (D1 stádiumú, 0/7 betegek; D2 stádiumú, 4/4 betegek) antigén-pozitív sejtek voltak a csontvelőben. Arra a következtetésre jutottak, hogy a csontvelő-aspirátumok immunhisztokémiai festése nagyon hasznos az okkult csontvelő metasztázisok kimutatására látszólag lokalizált prosztatarákban szenvedő betegeknél.

bár a tumorral összefüggő monoklonális antitesteket alkalmazó immuno-citokémia javított képességhez vezetett az okkult emlőrákos sejtek kimutatásához a csontvelő aspirátumokban és a perifériás vérben, ennek a módszernek a további fejlesztése szükséges, mielőtt rutinszerűen alkalmazható lenne. Az immuno-citokémia egyik fő hátránya, hogy csak tumorhoz kapcsolódó és nem tumorspecifikus monoklonális antitesteket használnak, és ennek eredményeként bizonyos keresztreakció léphet fel a normál sejtekkel.

az emlőrák hatékony stádiumba hozásához és az autológ őssejt infúzió előtti tisztítási kezelések hatékonyságának értékeléséhez fontos még kis mennyiségű emlőrákos sejt kimutatása is. Az immunhisztokémiai módszerek ideálisak erre a célra, mivel egyszerűek, érzékenyek és meglehetősen specifikusak. Franklin et al. érzékeny immuncitokémiai vizsgálatot végzett négy monoklonális antitest (260f9, 520c9, 317g5 és BrE-3) kombinációjával a tumorsejtek felszíni glikoproteinjei ellen a csontvelőben és a perifériás vérben lévő emlődaganatsejtek azonosítására. Az eredmények alapján arra a következtetésre jutottak, hogy a csontvelő és a perifériás vér immuno-citokémiai festése érzékeny és egyszerű módszer az emlőrákos sejtek kimutatására és számszerűsítésére.

a szolid tumoros betegek metasztatikus relapszusának egyik fő oka a rosszindulatú sejtek korai terjesztése. A citokeratinekre specifikus monoklonális antitestek (MAB-k) alkalmazása képes azonosítani a csontvelőben a disszeminált egyedi hámsejteket.

egy tanulmány arról számol be, hogy kifejlesztettek egy immuno-citokémiai eljárást a 18. számú citokeratin komponens (CK18) és a prosztata-specifikus antigén (PSA) egyidejű címkézésére. Ez elősegítené a disszeminált egyedi epitheliális tumorsejtek további jellemzését prosztatarákban szenvedő betegeknél. A jóindulatú prosztata hipertrófiában szenvedő betegek tizenkét kontroll aspirátuma negatív festést mutatott, ami tovább támasztja alá a ck18 specifitását a csontvelő hámsejtjeinek kimutatásában.

az effúzióval komplikált rosszindulatú betegség legtöbb esetben a neoplasztikus sejtek könnyen felismerhetők. Bizonyos esetekben azonban a rosszindulatú sejtek nem olyan könnyen láthatók, vagy jelenlétük túl kétséges ahhoz, hogy pozitív jelentésnek nevezzük. Az immuno-citokémiai technikák alkalmazása ezekben az esetekben növeli a diagnosztikai pontosságot.

Ghosh, Mason és Spriggs 53 mintát elemzett pleurális vagy peritoneális folyadékból 41 rosszindulatú betegségben szenvedő betegtől. A hagyományos citológiai vizsgálat nem mutatott ki neoplasztikus sejteket. Három monoklonális antitestet (anti-CEA, Ca 1 és HMFG-2) használtak a rosszindulatú sejtek keresésére. Az immuncitokémiai címkézést festetlen keneteken végezték, amelyeket -20-on tároltak kb 18 hónapok. A negyvenegy eset közül tizenkét, amelyben immuno-citokémiai festést végeztek, rosszindulatú sejteket tártak fel. Az eredmény a diagnosztikai pontosság körülbelül 20% – os növekedését jelentette. A vizsgálat arra a következtetésre jutott, hogy rosszindulatú betegség gyanúja esetén az immuno-citokémiai címkézést rutinszerűen kell alkalmazni a citológiailag negatív minták vizsgálatakor, és ez fontos hatással van a beteg kezelésére.

az immuno-citokémiai festés másik alkalmazása két antigén kimutatására szolgál ugyanabban a kenetben. A könnyű láncú antitestekkel, valamint a T-és B-sejt markerekkel végzett kettős festés jelezheti a limfóma neoplasztikus eredetét.

egy tanulmány egy hibridoma sejtvonal (1e10 klón) izolálásáról számolt be, amely monoklonális antitestet (IgM, k izotípus) termel. Ez a monoklonális antitest a nukleolusok specifikus immuncitokémiai festését mutatja.

a szöveteket és tumorokat monoklonális antitestek segítségével osztályozhatjuk bizonyos markerek expressziója alapján. Segítenek a morfológiailag hasonló elváltozások megkülönböztetésében, valamint a differenciálatlan metasztázisok szerv-vagy szöveti eredetének meghatározásában. Csontvelő, szöveti aspirátumok, nyirokcsomók stb. a kiválasztott monoklonális antitestek segítenek az okkult metasztázisok kimutatásában. A monoklonális antitestek növelik az érzékenységet az invazív vagy metasztatikus sejtek kis mennyiségének kimutatásában. A citokeratinekre specifikus monoklonális antitestek (MAB-k) képesek kimutatni a disszeminált egyedi hámsejteket a csontvelőben.