Hybridoma technology
anvendelsen af monoklonale antistoffer er talrige og omfatter forebyggelse, diagnose og behandling af sygdom. For eksempel kan monoklonale antistoffer skelne mellem undergrupper af B-celler og T-celler, hvilket er nyttigt til at identificere forskellige typer leukæmier. Derudover er specifikke monoklonale antistoffer blevet anvendt til at definere celleoverflademarkører på hvide blodlegemer og andre celletyper. Dette førte til klyngen af differentieringsserier af markører. Disse omtales ofte som CD-markører og definerer flere hundrede forskellige celleoverfladekomponenter i celler, hver specificeret ved binding af et bestemt monoklonalt antistof. Sådanne antistoffer er yderst nyttige til fluorescensaktiveret cellesortering, den specifikke isolering af bestemte typer celler.
i diagnostisk histopatologidit
ved hjælp af monoklonale antistoffer kan væv og organer klassificeres ud fra deres ekspression af visse definerede markører, som afspejler væv eller cellulær genese. Prostataspecifikt antigen, placental alkalisk phosphatase, humant choriongonadotropin, kurfetoprotein og andre er organassocierede antigener, og produktionen af monoklonale antistoffer mod disse antigener hjælper med at bestemme arten af en primær tumor.
monoklonale antistoffer er især nyttige til at skelne morfologisk lignende læsioner, som pleural og peritoneal mesotheliom, adenocarcinom og til bestemmelse af organ-eller vævsoprindelsen af udifferentierede metastaser. Udvalgte monoklonale antistoffer hjælper med påvisning af okkulte metastaser (kræft af ukendt primær oprindelse) ved immuncytologisk analyse af knoglemarv, andre vævsaspirater samt lymfeknuder og andre væv og kan have øget følsomhed over for normal histopatologisk farvning.
en undersøgelse udførte et følsomt immunhistokemisk assay på knoglemarvsaspirater af 20 patienter med lokaliseret prostatacancer. Tre monoklonale antistoffer (T16, C26 og AE-1), der er i stand til at genkende membran-og cytoskeletale antigener udtrykt af epitelceller til påvisning af tumorceller, blev anvendt i analysen. Knoglemarvsaspirater hos 22% af patienterne med lokal prostatacancer (fase B, 0/5; fase C, 2/4) og 36% patienter med metastatisk prostatacancer (fase D1, 0/7 patienter; fase D2, 4/4 patienter) havde antigenpositive celler i deres knoglemarv. Det blev konkluderet, at immunhistokemisk farvning af knoglemarvsaspirater er meget nyttig til at detektere okkulte knoglemarvsmetastaser hos patienter med tilsyneladende lokaliseret prostatacancer.
selvom immuncytokemi ved anvendelse af tumorassocierede monoklonale antistoffer har ført til en forbedret evne til at detektere okkulte brystkræftceller i knoglemarvsaspirater og perifert blod, er yderligere udvikling af denne metode nødvendig, før den kan bruges rutinemæssigt. En væsentlig ulempe ved immuncytokemi er, at kun tumorassocierede og ikke tumorspecifikke monoklonale antistoffer anvendes, og som et resultat kan der forekomme en vis krydsreaktion med normale celler.
for effektivt at iscenesætte brystkræft og vurdere effektiviteten af udrensningsregimer inden autolog stamcelleinfusion er det vigtigt at opdage selv små mængder brystkræftceller. Immunhistokemiske metoder er ideelle til dette formål, fordi de er enkle, følsomme og ret specifikke. Franklin et al. udført et følsomt immuncytokemisk assay ved anvendelse af en kombination af fire monoklonale antistoffer (260f9, 520c9, 317g5 og BrE-3) mod tumorcelleoverfladeglycoproteiner for at identificere brysttumorceller i knoglemarv og perifert blod. De konkluderede ud fra resultaterne, at immuncytokemisk farvning af knoglemarv og perifert blod er en følsom og enkel måde at opdage og kvantificere brystkræftceller på.
en af hovedårsagerne til metastatisk recidiv hos patienter med solide tumorer er den tidlige spredning af maligne celler. Anvendelsen af monoklonale antistoffer (mAbs), der er specifikke for cytokeratiner, kan identificere disseminerede individuelle epiteltumorceller i knoglemarven.
en undersøgelse rapporterer om at have udviklet en immuncytokemisk procedure til samtidig mærkning af cytokeratinkomponent nr. 18 (CK18) og prostataspecifikt antigen (PSA). Dette ville hjælpe med den yderligere karakterisering af disseminerede individuelle epithelial tumorceller hos patienter med prostatacancer. De tolv kontrolaspirater fra patienter med godartet prostatahypertrofi viste negativ farvning, hvilket yderligere understøtter specificiteten af CK18 til påvisning af epiteltumorceller i knoglemarv.
i de fleste tilfælde af ondartet sygdom kompliceret af effusion kan neoplastiske celler let genkendes. I nogle tilfælde ses maligne celler imidlertid ikke så let, eller deres tilstedeværelse er for tvivlsom til at kalde det en positiv rapport. Anvendelsen af immuncytokemiske teknikker øger diagnostisk nøjagtighed i disse tilfælde.
Ghosh, Mason og Spriggs analyserede 53 prøver af pleural eller peritoneal væske fra 41 patienter med malign sygdom. Konventionel cytologisk undersøgelse havde ikke afsløret nogen neoplastiske celler. Tre monoklonale antistoffer (anti-cea, Ca 1 og HMFG-2) blev brugt til at søge efter maligne celler. Immunocytokemisk mærkning blev udført på ufarvede udstrygninger, som var blevet opbevaret ved -20 liter C op til 18 måneder. Tolv af de enogfyrre tilfælde, hvor immuncytokemisk farvning blev udført, afslørede maligne celler. Resultatet repræsenterede en stigning i diagnostisk nøjagtighed på cirka 20%. Undersøgelsen konkluderede, at immuncytokemisk mærkning hos patienter med mistanke om ondartet sygdom bør anvendes rutinemæssigt til undersøgelse af cytologisk negative prøver og har vigtige implikationer med hensyn til patienthåndtering.
en anden anvendelse af immuncytokemisk farvning er til påvisning af to antigener i samme smear. Dobbeltfarvning med lette kædeantistoffer og med T-og B-cellemarkører kan indikere den neoplastiske Oprindelse af et lymfom.
en undersøgelse har rapporteret isoleringen af en hybridomacellelinie (klon 1e10), der producerer et monoklonalt antistof (IgM, k-isotype). Dette monoklonale antistof viser specifik immuno-cytokemisk farvning af nucleoli.
væv og tumorer kan klassificeres ud fra deres ekspression af visse markører ved hjælp af monoklonale antistoffer. De hjælper med at skelne morfologisk lignende læsioner og ved bestemmelse af organ-eller vævsoprindelsen af udifferentierede metastaser. Immuno-cytologisk analyse af knoglemarv, væv aspirater, lymfeknuder osv. med udvalgte monoklonale antistoffer hjælper med påvisning af okkulte metastaser. Monoklonale antistoffer øger følsomheden ved påvisning af selv små mængder invasive eller metastatiske celler. Monoklonale antistoffer (MAB ‘ er), der er specifikke for cytokeratiner, kan detektere disseminerede individuelle epitheliale tumorceller i knoglemarven.