Colorazione TUNEL e dosaggio TUNEL

Gao Y et al. usato HRP-DAB TUNEL assay kit ab206386 per analizzare sezioni di tessuto da ovaie di topo. a. Sezione trattata con DNasi I come controllo positivo. b. Controllo negativo senza enzima TdT. c e f. immagini sperimentali rappresentative. I nuclei macchiati con il test di TUNEL sono marroni. Le sezioni sono state contrastate con il verde metilico.

Vantaggi e svantaggi dei metodi di colorazione TUNEL

colorazione TUNEL / TUNEL assay protocolli che utilizzano un nucleotide direttamente contrassegnati con un colorante fluorescente sono più veloci dei metodi indiretti, che utilizza un anticorpo o un streptavidina-biotina complesso, in quanto richiedono meno di colorazione passi.

I metodi che si basano su nucleotidi etichettati con biotina possono beneficiare dell’amplificazione del complesso streptavidina-biotina. Richiedono ulteriori passaggi di blocco per neutralizzare la biotina endogena e ridurre la colorazione di fondo, sebbene questi siano comuni a tutti i ricercatori che eseguono l’immunoistochimica cromogenica tradizionale.

I metodi basati su BrdU possono anche produrre un segnale più luminoso poiché BrdU è tipicamente più facilmente incorporato dall’enzima TdT.

La popolarità relativa dei metodi TUNEL staining / TUNEL assay

Un sondaggio di 50 articoli di ricerca pubblicati nel 2017 contenenti il termine “TUNEL Assay” o “TUNEL Staining”, ha rivelato che:

– il 50% delle carte dUTP direttamente coniugato con FITC

– 15% utilizzato biotina-dUTP e streptavidina-HRP

– 15% utilizzato FITC-dUTP e un anti-CONIUGATO anticorpo coniugato con HRP

– 12% utilizzato digoxygenin-dUTP, e un anti-digoxygenin anticorpo coniugato con un colorante fluorescente o HRP

– 8% utilizzato Br-dUTP e un anti-BrdU anticorpo coniugato con un colorante fluorescente

Tutte le carte intervistati usato il saggio TUNEL in imaging piuttosto che di citometria a flusso. Dove è stato utilizzato HRP, DAB substrato è stato aggiunto per creare una macchia marrone. Più del 90% dei documenti di ricerca ha utilizzato un kit per la colorazione TUNEL.