Northern blot

Un northernblot è un metodo di laboratorio utilizzato per rilevare specifiche molecole di RNA tra amiscela di RNA. Northern blotting può essere utilizzato per analizzare un campione di RNA da un tipo di tessuto o cellulare particolare al fine di misurare l’espressione di RNA ofparticular geni. Questo metodo è stato chiamato per la sua somiglianza con la tecnicanoto come una macchia meridionale.

Il primo passo in una macchia settentrionale consiste nel denaturare, o separare, l’RNA all’interno del campione in singoli filamenti, il che assicura che i fili siano spiegati e che non vi sia alcun legame tra i fili. Le molecole di RNA vengono quindi separatesecondo le loro dimensioni usando un metodo chiamato elettroforesi su gel. Seguenteseparazione, l’RNA viene trasferito dal gel su una membrana assorbente.(Anche se questo passaggio è ciò che dà alla tecnica il nome “northern blotting”, il termine è tipicamente usato per descrivere l’intera procedura.) Una volta che il transferis completo, la membrana assorbente trasporta tutte le bande del RNA originalmente sul gel. Successivamente, la membrana viene trattata con un piccolo pezzo di DNA o RNA chiamato sonda, che è stata progettata per avere una sequenza complementare alla sequenza di RNA particolare nel campione; questo consente alla sonda di ibridarsi, orbind, con uno specifico frammento di RNA sulla membrana. Inoltre, la sonda ha alabel, che è tipicamente un atomo radioattivo o un colorante fluorescente. Quindi, dopo l’ibridazione, la sonda permette alla molecola di RNA di interesse di essere rilevata tra le molte molecole di RNA diverse sulla membrana.