プロテイナーゼK

カルシウムによって活性化され、酵素は疎水性アミノ酸（脂肪族、芳香族および他の疎水性アミノ酸）の後に優先的にタンパク質を消化する。 カルシウムイオンは酵素活性に影響を与えませんが、それらはその安定性に寄与します。インキュベーション時間が長く、プロテアーゼ濃度が十分に高い場合、タンパク質は完全に消化されます。 カルシウムイオンを除去すると、酵素の安定性は低下するが、タンパク質分解活性は残る。 プロテイナーゼKは、活性中心の近くに位置しているが、触媒機構に直接関与していないCa2+のための二つの結合部位を持っています。 残留活性は、通常、核酸調製物を汚染するタンパク質を消化するのに十分である。 したがって、核酸の精製のためのプロテイナーゼKによる消化は、通常、EDTA（ヌクレアーゼのような金属イオン依存性酵素の阻害）の存在下で行われる。

プロテイナーゼKは、広いpH範囲（4-12）にわたって安定であり、pH最適値はpH8.0である。37℃から50–60℃までの反応温度の上昇は、0.5-1％ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）または塩化グアニジニウム（3M）、チオシアン酸グアニジニウム（1M）および尿素（4M）の添加のように、活性を数回増加させる可能性がある。 上記の条件は、その基質切断部位をよりアクセス可能にすることにより、プロテイナーゼK活性を増強する。 65°Cの上の温度、トリクロロ酢酸（TCA）またはセリンプロテアーゼ抑制剤AEBSF、PMSFまたはDFPは活動を禁じます。 プロテイナーゼＫは、塩化グアニジニウム、チオシアン酸グアニジニウム、尿素、サルコシル、トリトンＸ−１ ０ ０、Ｔｗｅｅｎ２ ０、ＳＤＳ、クエン酸塩、ヨード酢酸、ＥＤＴＡ、またはＮａ−トシル−Ｌｙｓクロロメチルケトン（ＴＬＣＫ）およびＮａ−トシル−Ｐｈｅクロロメチルケトン（ＴＰＣＫ）のような他のセリンプロテアーゼ阻害剤によって阻害されない。

一般的に使用される緩衝液中のプロテアーゼK活性