남부 블로 팅이란 무엇입니까?

한나 시몬스,석사.B.Sc(편집자)

블로 팅은 시각화하기 위해 유전자,단백질 또는 단백질이 멤브레인으로 전달되는 과정입니다.이러한 방법 중 첫 번째 방법은 1975 년 에드워드 서던스가 개발한 서던 블로 팅으로,유전자 조각의 시퀀스를 감지하는 데 사용됩니다. 그 이후로 북부 및 서부 블로 팅이라는 두 가지 다른 방법이 개발되었습니다. 이들은 각각 단백질 및 단백질 서열을 식별하는 데 사용되는 프로세스입니다.

서던 블로 팅 방법론

유전자 단편은 초기에 제한 효소로 생성되고 겔 전기 영동이라고하는 공정에서 크기에 따라 분리된다. 그런 다음 알칼리성을 사용하여 이중 가닥 유전자를 변성시켜 단일 가닥을 형성합니다. 그 후,니트로셀룰로오스 또는 나일론 시트 상에 젤에 멤브레인을 놓고 버퍼의 흐름을 이용하여 젤에서 멤브레인으로의 이동을 장려한다.

모세관 흐름 및 진공 전달은 유전자 조각을 전달하는 데 사용되는 가장 일반적인 두 가지 방법입니다. 모세관 흐름에서 겔은 멤브레인이 위에 놓여있는지지 블록의 완충 수준 위에 놓입니다. 흡수성 수건의 더미는 막에 그 때 두고 막에 유전자 파편을 위로 드는 젤 아래에서 완충기를 흡수하기 위하여 이용됩니다.

진공 전달을 사용하여,멤브레인은 겔 아래에 배치되고 둘 다 완충액 내에 잠긴다. 그런 다음 진공을 사용하여 멤브레인에 유전자 조각을 끌어 내리는 흐름을 만듭니다.

그런 다음 가열 또는 자외선을 사용하여 유전자 조각이 막에 영구적으로 부착 된 채로 유지되도록하는 동시에 유전자 배열의 특정 배열을 유지합니다. 그런 다음 단일 좌초 레이블이 지정된 프로브를 사용하여 대상 시퀀스에 바인딩합니다.

시트는 이들 프로브와 함께 배양되고 상보적인 프로브 만이 결합된다. 그런 다음 비보상 프로브를 멤브레인에서 세척하여 바운드 프로브 만 남아있게합니다. 이 프로브는 엑스레이 필름에서 하이브리드 화 패턴을 나타 내기 위해 자동 방사선 촬영으로 감지 할 수 있습니다.

서던 블로 팅의 응용

서던 블로 팅은 많은 다른 용도를 가지고 있습니다. 첫째,유전자 재배치를 분석 할 수 있습니다. 예를 들어,면역학 이 방법은 티 세포 수용체 유전자의 클론 재배치를 식별하는 데 사용될 수 있습니다. 둘째,유전자의 특정 단편은 다른 많은 단편의 혼합물 내에서 식별 될 수 있습니다.

용도의 다른 예는 제한 단편 길이 다형성 및 가변 번호 탠덤 반복 분석을 모두 포함한다. 유전체 서열의 길이 차이를 사용하여 게놈을 매핑하고 법의학 및 친자 확인 테스트에 사용할 수 있습니다.

VNTR 분석의 차이를 이용해서 길이가 반복되는 염기서열을 형성하 DNA 지문,방법에서 일반적으로 사용되는 친자 확인 및 법의학 테스트합니다.

이러한 방법은 또한 돌연변이로 인한 질병,예를 들어 겸상 적혈구 빈혈의 진단에 사용될 수 있습니다. 이 유전 적 상태는 단일 뉴클레오티드 다형성(ㅏ…에 티)베타 글로빈 유전자에서 비정상적인 헤모글로빈을 유발합니다.

허약 엑스 증후군에 대한 서던 블로 팅

서던 블로 팅 증폭 된 반복 영역을 가진 유전자를 식별하는 데 광범위하게 사용되었습니다. 이들은 유전자 산물을 인코딩하지 않는 유전자에 있는 짧고,반복적인 서열입니다. 서던 블로 팅이 유용 할 수있는 한 가지 예는 허약 한 엑스 증후군의 진단에 있습니다. 이 유전 적 상태는 유전자 내에 위치한 유전자 반복 영역의 증가로 인한 것입니다.

이 유전자는 일반적으로 5-40 개의 반복 영역을 포함합니다. 55-200 번의 반복을 가진 개체는 유전자 전조를 가지고 있고,>200 번의 반복을 가진 개체는 허약 한 엑스 증후군을 가지고 있습니다. 반복의 증가는 유전자의 메틸화로 이어지며,이는 전사를 억제하고 단백질의 생산을 방지합니다. 이 단백질은 신경계의 정상적인 기능에 필요하므로 단백질 기능의 상실은 깨지기 쉬운 엑스 증후군의 증상을 유발합니다.

진단에서 메틸화-민감성 제한 효소 에코르 1 과 메틸화-민감성 효소 에코르 1 은 메틸화 대립 유전자 및 비 메틸화 대립 유전자의 분화를 허용하는데 사용된다. 메틸화 된 대립 유전자는 한 번만 절단되어 5.1 킬로바이트의 단편을 제공합니다.

그러나 비 메틸화 대립 유전자는 두 번 절단되어 2.8 킬로바이트의 단편을 생성한다. 따라서 비 메틸화 전위 반복(<200)은 약 200 회 반복의 메틸화 돌연변이 반복과 구별 될 수 있습니다.

미래 전망

전반적으로,서던 블로 팅은 질병(예:허약 엑스 증후군 및 겸상 적혈구 빈혈증)의 진단 및 연구와 다른 이유(예:법의학 및 친자 확인 검사)에 대한 유전자 분석에서 중요한 방법입니다.

그러나 서던 블로 팅은 기술적으로 매우 복잡하고 비용이 많이 들고 힘들며 많은 양의 유전자 샘플을 필요로합니다. 따라서 새로운 방법은 서던 블로 팅을 천천히 대체하고 있습니다. 이 과정은 남부 블로 팅보다 훨씬 쉽고 빠르며 매우 작은 양의 유전자 만 필요합니다.

추가 읽기

• 모든 유전학 내용
• 유전학이란 무엇인가?
• 유전학의 역사
• 유전학과 유전자 발현
• 유전적 변화

글

한나 시몬스

한나는 과학 석사와 의학 및 생명 과학 작가(M.Sc.)영국 랭커스터 대학교 학위. 작가가되기 전에,한나의 연구는 알츠하이머 및 파킨슨 병에 대한 바이오 마커의 발견에 초점을 맞추었다. 그녀는 또한 이러한 질병에 관련된 생물학적 경로를 더욱 명확히하기 위해 노력했습니다. 그녀의 작품의 외부,한나는 수영을 즐긴다,산책 그녀의 개를 복용하고 세계를 여행.

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