mål

at lære teknikken til lateks agglutination.

lateksagglutination observeres, når en prøve indeholdende det specifikke antigen (eller antistof) blandes med et antistof (eller antigen), der er belagt på overfladen af lateks-partikler.

i 1956 Singer og Plotts først beskrevet Rheumatoid faktor Test, en test baseret på lateks agglutination. Ved reumatoid arthritis (RA) reagerer IgG-antistoffer produceret af lymfocytter i det synoviale led med IgM-antistofferne (RF, reumatoid faktor) for at generere immunkomplekser, der aktiverer komplementet og forårsager vævsdestruktion. RA er af diagnostisk betydning.

siden da er test til påvisning af mikrobielle og virale infektioner, autoimmune sygdomme, hormoner, lægemidler og serumproteiner blevet udviklet og markedsført af mange virksomheder over hele verden. Princippet bruges til diagnosticering af mange infektioner såsom Hepatitis B, H. influensae, N. meningitidis osv.. Alle metoder til påvisning eller kvantificering af antigen eller antistof drager fordel af det faktum, at de reagerer for at danne et kompleks. Ved den optimale antigen-antistofkoncentration udfældes dette kompleks. Men hvis antigenet er partikelformet, observeres agglutination af antigen-antistofkompleks.

agglutinationsreaktioner

reaktionen mellem et partikelformet antigen og et antistof resulterer i synlig klumpning kaldet agglutination. Antistoffer, der producerer sådanne reaktioner, er kendt som agglutininer. Princippet om agglutinationsreaktioner ligner udfældningsreaktioner; de afhænger af tværbindingen af polyvalente antigener. Når antigenet er en erytrocyt, kaldes det hæmagglutination.Teoretisk set kan alle antistoffer agglutinere partikelantigener, men IgM er på grund af dets høje specificitet et særligt godt agglutinin.

der er ingen agglutination kan observeres, når koncentrationen af antistof er høj, (lavere fortyndinger), og derefter fortyndes prøven, agglutination forekommer. Effekten er defineret som usynligheden af agglutination ved høje koncentrationer af antistoffer. Det skyldes grunden til, at overskydende antistof danner meget små komplekser, der ikke klumper sig sammen for at danne synlig agglutination.

kvalitativ agglutinationstest

agglutinationstest kan anvendes på en kvalitativ måde til analyse for tilstedeværelsen af et antigen eller et antistof. Antistoffet blandes med det partikelformede antigen, og en positiv test indikeres ved agglutination af det partikelformede antigen.

for eksempel for at bestemme patientens blodtype kan personens røde blodlegemer blandes med antistof mod et blodgruppeantigen. Et andet eksempel er, at for at analysere tilstedeværelsen af antistoffer i en patientprøve blandes patientens serum med de røde blodlegemer (RBC) af en kendt blodtype.

kvantitativ agglutinationstest

for at måle niveauet af antistoffer mod partikelformede antigener kan agglutinationstest anvendes i vid udstrækning. Til denne test kan der foretages serielle fortyndinger af prøven, og den testes for antistof. Derefter kan der tilsættes en fast mængde partikelformet antigen eller bakterier eller røde blodlegemer. Bestem den maksimale fortynding, der danner agglutination, og denne maksimale fortynding, der giver observerbar agglutination, kaldes titeren. Resultaterne vises som den gensidige af den maksimale fortynding, der danner synlig agglutination.

passiv hæmagglutination

følsomheden og enkelheden af agglutinationsreaktioner kan udvides til opløselige antigener ved hjælp af teknikken med passiv hæmagglutination. I denne teknik fremstilles antigenbelagte røde blodlegemer ved at blande et opløseligt antigen med røde blodlegemer, der er blevet behandlet med garvesyre eller kromchlorid, som begge fremmer adsorption af antigen til overfladen af cellerne. Det er imidlertid muligt at belægge erythrocytter med et opløseligt antigen (f. eks.. et polysaccharid eller en hapten) og brug de overtrukne røde blodlegemer i en agglutinationstest for antistof mod det opløselige antigen.

serielt fortyndet serum, der indeholder antistof, indlæses til hver brønd i mikrotiterpladen, efter at antigenbelagte røde blodlegemer påføres hver brønd. Det karakteristiske mønster af agglutinerede røde blodlegemer på brøndene bruges som et værktøj til analyse af agglutinationsreaktionerne. Hvis antigenet er partikelformet, kan antigenet reagere med antistoffet i serum og resulterer i klumpning af antigen, hvilket viser et positivt resultat.

i løbet af de sidste mange år har der været et skift væk fra røde blodlegemer til syntetiske partikler, såsom lateksperler. Præparatet kan enten anvendes straks eller opbevares til senere brug. Brugen af syntetiske perler giver fordelene ved konsistens, ensartethed og stabilitet. Desuden kan agglutinationsreaktioner, der anvender syntetiske perler, læses hurtigt, ofte inden for 3 til 5 minutter efter blanding af perlerne med testprøven. Uanset om det er baseret på røde blodlegemer eller de mere bekvemme og alsidige syntetiske perler, er agglutinationsreaktioner enkle at udføre, kræver ikke dyrt udstyr og detekterer en lille mængde antistof ( koncentrationer så lave som nanogram pr.

det første trin i testen er sammenkoblingen af latekspartiklen af antistofmolekylerne, der specifikt binder til de antigene determinanter på overfladen af partiklerne. Der er en dannelse af store gitter gennem disse tværbindinger, og disse store gitter sedimenterer let på grund af den store størrelse af klumper og er synlige for det blotte øje inden for få minutter. Graden af agglutination kan bestemmes ved at plotte den aggutinante koncentration, der giver en klokkeformet kurve. Antigen-antistofkomplekserne kan forstørres ved hjælp af lateks-partiklerne. Mange af agglutinationstestene udføres manuelt og detekteres ved visuel observation. For at bestemme agglutination skal der indeholde omkring 100 klumper, og disse klumper skal være på omkring 50 mikrometer i størrelse for at blive set af øjet.

Agglutinationsinhiberingsreaktioner

hvis antistoffet inkuberes med antigen inden blanding med lateks, hæmmes agglutination; dette skyldes, at frie antistoffer ikke er tilgængelige til agglutination. Ved agglutinationsinhibering er fraværet af agglutination diagnostisk for antigen, giver et højt følsomt assay for små mængder antigen. For eksempel hjem graviditet kits indeholder humant choriongonadotropin (HCG hormon) belagt lateks partikel og antistof til HCG. En gravid kvinde urin indeholder HCG, som udskilles af den udviklende placenta efter befrugtning. Tilsætningen af urin indeholdende HCG hæmmer agglutination af latekspartikler, når anti-HCG-antistoffet tilsættes; og således er graviditeten indikeret ved fravær af agglutination.

det lateks partikler

Emulsionspolymerisering er den procedure, der anvendes til fremstilling af lateks partikler. For det første blandes styren med den overfladeaktive opløsning (natriumdodecylsulfat), danner en milliard emulgerede miceller, der er i ensartet diameter. Derefter tilsættes en lille mængde kaliumpersulfat til det, som er en vandopløselig polymerisationsinitiator. Når polymeriseringsprocessen er afsluttet, arrangeres polystyrenkæderne i micellerne. Carbonhydriddelen af polystyrenkæden er fastgjort til midten og den terminale sulfation til kuglens overflade, der udsættes for vandfasen. Andre carbonhydrider og dets derivater anvendes også til fremstilling af de ensartede latekspartikler, nogle af eksemplerne er stryren-dlvinylbencen, polymethylmethacrylat, styrenvinyltoluen, polyvinyltoluen etc.

processen med lateks partikelproduktion udvikles fra syntetisk gummiproduktion, og emulsionen har også et mælkeagtigt udseende, udtrykket lateks gives til det .Den ønskede diameter af lateks partikel kan fremstilles ved at modificere fremstillingsprocessen, carbonhydrider, de overfladeaktive stoffer og initiatoren. Partikelstørrelsen af latekser er normalt mellem 0,05 liter og 2 liter. På grund af tilstedeværelsen af sulfat-og sulfonationer på overfladen af partiklen, som tilvejebringer en iboende negativ overfladeladning til partiklen.

latekspartiklerne kan funktionaliseres og overfladebehandles for at lette bindingsstabiliteten og for at øge analytfastgørelsen. For at øge egenskaberne af lateks partikler anvendes funktionelle behandlinger såsom amidation, aminering, karboksylation, hydroksylation og endda magnetisering. Også forskellige farver af latekspartikler er tilgængelige kommercielt, hvilket letter den visuelle udlæsning.

agglutinationstesten er en klinisk metode til påvisning af visse antigener eller antistoffer i en række kropsvæsker, såsom blod, spyt, urin eller cerebrospinalvæske. Prøven, der skal testes, sendes til laboratoriet, og hvor den blandes med lateksperler belagt med et specifikt antigen eller antistof. Klumpning af lateksperler (agglutination) indikerer tilstedeværelsen af mistænkte partikler.

lateks agglutinationstest indeholder nogle af fordelene .De er,

1. Evne til at opnå semi kvantitative resultater.
2. Lave individuelle testomkostninger.
3. Relativt kort tid til at opnå resultater.

ved at udføre 2 til 10 gange fortyndinger af prøver kan vi opnå de semi kvantitative resultater .Agglutinationstest har også nogle ulemper, som inkluderer

1.Nødt til omhyggeligt at fortolke marginale resultater og
2. Problemer med specificitet på grund af interfererende stoffer i mange analyser.