Galleesculin Test For Presumptiv Identifikasjon Av Enterokokker Og Streptokokker: Effekter Av Gallekonsentrasjon, Inokulasjonsteknikk og Inkubasjonstid

Anerkjennelse og differensiering av katalase-negative, alfa-hemolytiske og ikke-hemolytiske gram-positive kokker i par og kjeder som enterokokker; gruppe d streptokokker (hovedsakeligstreptococcus bovis); og ikke-gruppe d viridans gruppe streptokokker er klinisk viktige (10). Galle-esculin-testen er mye brukt til å skille enterokokker Og gruppe d streptokokker, som er galle tolerante og kan hydrolysere esculin til esculetin, fra ikke – gruppe d viridans gruppe streptokokker, som vokser dårlig på galle. Først beskrevet I 1926 Av Meyer Og Schonfeld (8), ble galleesculinprøven vist Av Facklam og Moody (2, 3, 5) å ha en følsomhet på 100% og en spesifisitet på 97% for å identifisere enterokokker og gruppe d streptokokker. Disse resultatene ble oppnådd med agar slants inneholdende 4% oxgall (gallsalter), inokulert med 1 eller 2 dråper Av En 24-h Todd-Hewitt både kultur av organismen («neste dag» inokulasjon) og inkubert for 48 h. i rutinemessig diagnostisk bakteriologi er en slik protokoll upraktisk, siden det krever 3 dager fra det tidspunkt kolonier oppdages på primærplater. De fleste lærebøker og prosedyrehåndbøker anbefaler å inokulere agar slants direkte fra noen få kolonier («samme dag» inokulasjon) i stedet for fra en 24-h subkultur i buljong, men data som støtter denne ikke-standardiserte alternative teknikken mangler.

derfor evaluerte vi sensitiviteten og spesifisiteten til galleeskulintesten med to forskjellige metoder for inokulering samme dag (standardisert og ikke-standardisert) og to forskjellige inkubasjonstider (24 og 48 h). Vi sammenlignet også esculin slants som inneholder 2 og 4% oxgall i formuleringer som for tiden er tilgjengelige fra to store kommersielle kilder i Usa.

Katalase-negative, gram-positive kokker i par og kjeder som danner alfa-hemolytiske eller ikke-hemolytiske kolonier på 5% saueblodagar som var positive for PYR (Murex, Dartford, Storbritannia) og vokste i tryptisk soyabuljong som inneholdt 6,5% NaCl (Becton Dickinson Microbiology Systems , Cockeysville, Md.) ble identifisert som enterokokker; de ble speciated MED API Rapid Strep system (biomé Vitek, Hazelwood, Mo.). Katalase-negative, gram-positive kokker i par og kjeder som danner alfa-hemolytiske eller ikke-hemolytiske kolonier som var negative FOR PYR, vokste ikke i 6,5% NaCl, var positive for gruppe D-antigen ved lateksagglutinering (Murex), og hadde et suggestivt (≥90% sannsynlighet) biokjemisk mønster ved API Rapid Strep-systemet ble identifisert Som S. bovis. Katalase-negative, gram-positive kokker i par og kjeder som danner alfa-hemolytiske eller ikke-hemolytiske kolonier som var negative FOR PYR og gruppe D-antigen (og var uoppløselige i galle hvis alfa-hemolytisk) ble kalt viridans gruppe streptokokker.

totalt 110 enterokokkstammer (34 Enterococcus faecalis, 15 Enterococcus faecium og 61 ikke-hemolytiske og ikke-spesifikke stammer), 30 s. bovis-stammer (2 alfa-hemolytiske og 28 ikke-hemolytiske stammer) og 110 ikke-gruppe d viridans-gruppe streptokokkstammer (83 alfa-hemolytiske og 27 ikke-hemolytiske stammer) ble testet. Stammene ble isolert etter hvert fra blodkulturer utført Ved Duke University Medical Center i løpet av en 4-års periode, bortsett fra 19 s. bovisstrains som ble hentet fra Mayo Clinic.

Friske (24-h) bakterier ble inokulert på tre forskjellige esculin agar slants som inneholdt enten ingen galle (BDMS), 2% oxgall (tilsvarende 20% galle) (BDMS), eller 4% oxgall (tilsvarende 40% galle) (Remel, Lenexa, Kan.). Bortsett fra oxgall var komposisjonene til de tre mediene de samme. For hvert medium ble følgende to inokuleringsteknikker brukt: (i) direkte, ikke-standardisert S-formet inokulering av 1 til 10 kolonier og (ii) indirekte, standardisert inokulering av 10 µ (kalibrert sløyfe) av en 0,5 McFarland standard suspensjon av bakterier i sterilt avionisert vann. Slantene ble inkubert ved 35°C i omgivende luft (2) med løse caps for 48 timer. Avlesninger ble tatt ved 24 og 48 timer.en reaksjon ble ansett som positiv når halvparten eller mer av mediet ble svartet (4).

med ett unntak ga alle 110 enterokokkstammer klare positive reaksjoner etter 24 og 48 timer inkubasjon (99% sensitivitet). Det standardiserte inokulumet (omtrent 106 CFU) var like følsomt som det tyngre, ikke-standardiserte inokulumet. Facklam og Moody, ved bruk av et inokulum på 107 til 108 CFU på agar slants, rapporterte en følsomhet på 100% ved 48 timer, men fant at 2 av 76 (5) og 6 av 157 (3) enterokokstammer var galle-esculin negative (98% følsomhet) etter 24 timer med inkubasjon. Swan (13), ved bruk av et ikke-standardisert inokulum beskrevet som tunge og agarplater hvor noen svetting ble ansett å være et positivt resultat, oppnådde en følsomhet på 100% ved 24 h med 121 enterokokstammer. Likevel, basert På Facklams publikasjoner, anbefaler de fleste lærebøker og prosedyrehåndbøker inkubasjon for 48 timer før de rapporterer et negativt resultat.

Alle 30 stammer Av s. bovis var positive ved 24 og 48 h uavhengig av gallekonsentrasjonen eller metoden for inokulering (100% følsomhet). Facklam (3) rapporterte en sensitivitet på 94 og 100% ved henholdsvis 24 og 48 timer med 37 gruppe d streptokokkstammer.

Tabell 1 gir prosentandelen av falske positive galle-esculin tester for 110 ikke-gruppe d viridans gruppe streptokokk stammer. Vi fant at spesifisiteten (100% minus prosent falsk positiv) var maksimal (97%) med et standardisert inokulum stripet på agar slants inneholdende 4% oxgall og lest etter 24 h. Falske positiver ble oppnådd med to Streptococcus milleriog En Streptococcus lactis subsp. diacetylaktistammer. Mangel på standardisering av inokulumet, reduksjon i konsentrasjonen av oxgall til 2%, og forlengelse av inkubasjonstiden til 48 h økte antall falske positiver til maksimalt 24%. I tidligere studier med en selektiv esculin agar inneholdende natriumazid og bare 10% galle, var positive reaksjoner med ikke-gruppe d viridans gruppe streptokokker vanlige (6, 11, 12). Ingen data om bruk av et medium som inneholder 2% oxgall har blitt publisert tidligere. Våre resultater tyder på at denne konsentrasjonen er suboptimal. Ved hjelp av 4% oxgall, Swan (13) funnet to galle-tolerant viridans gruppe streptokokk stammer ut av 21 isolater; verken stamme, derimot, hydrolysert esculin på 24 h.Facklam et al. rapportert spesifisitet på 99% ved 24 h (3) og 81 (4) til 97% (3) ved 48 h med 4% oxgall.

en slående forskjell ble funnet når undergruppene av alfa-hemolytiske og ikke-hemolytiske ikke – gruppe d viridans gruppe streptokokker ble sammenlignet for antall falske positiver. For alfa-hemolytiske stammer var dette tallet 0% etter 24 timer og 3% etter 48 timer, mens for ikke-hemolytiske stammer var Det 11% etter 24 timer og 33% etter 48 timer, med 4% oxgall og et standardisert inokulum (P = 0,017 for 24-h-verdier; two-tailed Fisher ‘ s exact test). En slik observasjon har ikke blitt rapportert tidligere.

for andre prøver enn blod og normalt sterile steder, er et flytskjema basert på galleaskulinprøven kombinert med 6,5% nacl-toleranse eller TILSTEDEVÆRELSE av PYR tilstrekkelig for pålitelig identifisering av enterokokker. Galle-esculin-positive organismer fra blod og normalt sterile steder bør spesifiseres. Spesiering av enterokokker er nyttig av epidemiologiske årsaker, og Fordi E. faecium og andre arter har en tendens til å være mer resistente mot antibiotika enn E. faecalis (8, 9). En definitiv identifikasjon avs. bovis er viktig, siden organismen er assosiert med kolonkarsinom, som bør utelukkes hos slike pasienter (7). På den annen side, falske positive rapporter ofS. bovis kan føre til unødvendige undersøkelser. Spesiering av galle-esculin-positive organismer vil også tillate påvisning av falske positive ikke – gruppe d viridans gruppe streptokokker. Terapeutiske feil kan oppstå ved feilidentifisering av streptokokker og enterokokker (1). Rutinemessig spesiering av galle-esculin-negative organismer er ikke nødvendig, siden enterokokker Og gruppe d streptokokker sjelden gir falske negative reaksjoner.

til slutt fungerer galleeskulintesten godt for å raskt skille enterokokker og gruppe d streptokokker fra ikke-gruppe d viridans gruppe streptokokker til lav pris og med god følsomhet (>99%) og spesifisitet (97%), forutsatt at den utføres på agar slants som inneholder 40% galle, gjort med et standardisert inokulum (10 µl av en 0,5 McFarland standard bakteriell suspensjon), og leses ved 24 timer.