Giemsa Flekk-Prinsipp, Prosedyre, Resultater, Tolkning

BY admin
|
Biologi Pedagogiske Videoer

Sist Oppdatert 5. februar 2020 Av Sagar Aryal

Introduksjon

Giemsa flekken var et navn vedtatt Fra En Tyskland Kjemiker forsker, for sin anvendelse av en kombinasjon av reagenser i å demonstrere tilstedeværelse av parasitter i malaria.

den tilhører En gruppe flekker kjent Som Romanowsky flekker. Disse er nøytrale flekker som består av en blanding av oksidert metylenblått, azurblått Og Eosin Y, og de utføres på et lufttørket lysbilde som er festet med metanol. Romanowsky flekker brukes i differensiering av celler, patologiske undersøkelser av prøver som blod og benmarg filmer og demonstrasjon av parasitter f. eks malaria. Det finnes fire typer Romanoswsky flekker:

  • Giemsa flekken
  • Jenner Flekken
  • wright flekken
  • Mai-Grunwald Flekken
  • Leishman flekken

Mål Av Giemsa flekken

  • for nøyaktig fremstilling Av Giemsa stain stock solution
  • å beise og identifisere blodceller
  • å skille blodceller kjerner fra cytoplasma

Prinsipp

Giemsa stain er en gullstandard fargingsteknikk som brukes til både tynne og tykke smører for å undersøke blod for malariaparasitter, en rutinemessig kontroll for andre blodparasitter og morfologisk differensiere nukleær og cytoplasma Av Erytrocytter, leukocytter og Blodplater og parasitter.

som Alle Typer Romanowsky flekker, det består av Både Sure og Grunnleggende fargestoffer, i forhold til slektskap av surhet og basisitet for blodceller. Azurblå og metylenblå, binder et grunnleggende fargestoff til syrekjernen som produserer blå-lilla farge. Eosin er et surt fargestoff som er tiltrukket av cytoplasma og cytoplasmatiske granulater som er alkalisk produserende rød farge. Flekken må bufres med vann til pH 6,8 eller 7.2, for å utfelle fargene for å binde enkle materialer.

Klassisk Er Giemsa-flekk en differensiell flekk som består av en kombinasjon av reagenser (Azurblå, Metylenblå og Eosin-fargestoff) som brukes mye i cytogenetikk og histopatologi for diagnose av:

  1. Malaria, spirocheter og andre blodparasitter
  2. Chlamydia trachomatis inklusjonsorganer
  3. Borrelia spp
  4. Histoplasma spp
  5. Pneumocystis jiroveci cyster

reagenser brukt

  • Metanol
  • Giemsa pulver
  • Glyserin
  • Vann (Buffer)

Prosedyre

Utarbeidelse Av Giemsa Flekken Lager løsning (500ml)

  1. I 250 ml metanol tilsettes 3,8 g Giemsa pulver og oppløses.
  2. Varm oppløsningen opp til ~60oc
  3. deretter tilsettes 250 ml glyserin til løsningen, sakte.
  4. Filtrer oppløsningen og la den stå i ca 1-2 måneder før bruk.

Forberedelse Av arbeidsløsning

  1. Tilsett 10 ml lageroppløsning til 80 ml destillert vann og 10 ml metanol

Fargeprosedyre 1: tynnfilmfarging

  1. på en ren, tørr mikroskopisk glassrute, lag en tynn film av prøven (blod) og la den lufttørke.
  2. dypp smøret (2-3 dips) i ren metanol for fiksering av smøret, la det lufttørke i 30sekunder
  3. Flom lysbildet med 5% Giemsa flekkløsning i 20-30 minutter.
  4. Skyll med vann fra springen og la tørke

MERK: i nødstilfeller, la Giemsa flekken løsning for 5-10 minutter

Farging Prosedyre 2: Tykk Film Flekker

  1. Legg til et tykt smør av blod og lufttørk i 1 time på et fargestativ.
  2. Dypp det tykke blodsmøret i fortynnet Giemsa-flekk(fremstilt ved å ta 1 ml av stamløsningen og tilsette til 49 ml fosfatbuffer eller destillert vann, men resultatene kan variere forskjellig).
  3. Vask smøret ved å dyppe inn i bufret vann med destillert vann i 3-5 minutter
  4. La det tørke

Resultater

Cytoplasma og cytoplasmatiske granulater av blodceller vises rød i fargen mens kjernen vises blå-lilla i fargen.

erytrocytene vil vises rosa i clour

  • Eosinofiler vil ha en blå-lilla kjerne, en blekrosa cytoplasma og oransje-røde granulater.
  • Nøytrofiler vil vises lilla-rød kjerne og en rosa cytoplasma.
  • Basofiler vil ha en lilla kjerne og blåaktig granulat.
  • Lymfocytter har en mørk blå kjerne og en lyseblå cytoplasma.
  • Monocytter vil ha en lilla kjerne og en rosa cytoplasma.
  • Blodplater vil ha lilla granulat.

Giemsa Flekk-Prinsipp, Prosedyre, Resultater, Tolkning

Bildekilde: Wikipedia

Tolkning

Azurblå og metylenblå, et grunnleggende fargestoff binder seg til syrekjernen som produserer blå-lilla farge. Eosin er et surt fargestoff som er tiltrukket av cytoplasma og cytoplasmatiske granulater som er alkalisk-produserende rød-oransje farge.

Applikasjoner Giemsa flekk

  1. Giemsa flekk er spesifikk for fosfatgruppene AV DNA. Det fester seg til dna-REGIONER med høye mengder adenin-tyminbinding.
  2. Giemsa stain brukes I Giemsa banding( G-banding), for å beise kromosomer, og det brukes ofte til å lage en diagrammatisk representasjon av kromosomer (idiogram).
  3. Som en differensiell flekk kan Giemsa-flekk brukes til å studere adhesjon av patogene bakterier til humane celler, differensiere humane celler som lilla og bakterielle celler som rosa.
  4. Det kan brukes til histopatologisk diagnose av malaria og noen spirochete og protozoan blodparasitter.
  5. Det brukes også I Wolbachs vevsflekk i.e flekker hematopoietisk vev og for identifisering av bakterier og rickettsia
  6. Giemsa stain er en klassisk blodfilm flekk for perifert blod utstryk og benmarg prøver. Røde Blodceller beise rosa, blodplater beise en lys blek rosa, lymfocytt cytoplasma flekker himmelblå, monocytt cytoplasma flekker blek blå, og leukocytt kjernefysisk kromatin flekker magenta.
  7. Giemsa flekken brukes også til å visualisere kromosomer, identifisere kromosomavvik som translokasjon og omorganisering,
  8. Giemsa flekker soppen Histoplasma, Chlamydia bakterier, og kan brukes til å identifisere Mastceller.

Fordeler

  • Lett tilgjengelig, lett å tilberede, vedlikeholde og bruke

Begrensninger

  • Arbeid Giemsa flekken må klargjøres kort tid før bruk.
  1. Farging teknikker: Giemsa Av Kathleen P Freeman, Karen L Gerber: Vetstream
  2. Paramedic Verden; Hematology Practicals/Giemsa farging Teknikk
  3. Hvordan Romanowsky flekker arbeid og hvorfor de forblir verdifulle-inkludert en foreslått universell Romanowsky flekker mekanisme og en rasjonell feilsøking ordningen Av Horobin RW. / ncbi. nlm. nih. gov

Internett Kilder

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK