Mål

for å lære teknikken for latex agglutinering.

Lateksagglutinering observeres når en prøve som inneholder det spesifikke antigenet (eller antistoffet) blandes med et antistoff (eller antigen) som er belagt på overflaten av latekspartikler.

Latex agglutinasjonstester har blitt brukt i kliniske laboratorier for påvisning av smittsomme sykdommer og I 1956 Singer Og Plotz først beskrevet Rheumatoid Factor Test, en test basert på latex agglutinering. Ved revmatoid artritt (RA) reagerer IgG-antistoffer produsert av lymfocytter i synovialledd Med IgM-antistoffene (RF, reumatoid faktor) for å generere immunkomplekser som aktiverer komplementet og forårsaker vevsødeleggelse. RA er av diagnostisk betydning.

siden da har tester for å oppdage mikrobielle og virale infeksjoner, autoimmune sykdommer, hormoner, legemidler og serumproteiner blitt utviklet og markedsført av mange selskaper over hele verden. Prinsippet brukes til å diagnostisere mange infeksjoner som Hepatitt B, h. influenzae, n. meningitidis, etc.. Alle metoder for å oppdage eller kvantifisere antigen eller antistoff utnytter det faktum at de reagerer for å danne et kompleks. Ved optimal antigen-antistoffkonsentrasjon faller dette komplekset ut. Men hvis antigenet er partikkelformet, observeres agglutinering av antigen-antistoffkompleks.

Agglutineringsreaksjoner

reaksjonen mellom et partikkel antigen og et antistoff resulterer i synlig klumping kalt agglutinering. Antistoffer som produserer slike reaksjoner er kjent som agglutininer. Prinsippet Om Agglutineringsreaksjoner ligner utfellingsreaksjoner; de er avhengige av kryssbindingen av polyvalente antigener. Når antigenet er en erytrocyt kalles det hemagglutinering.Teoretisk alle antistoffer kan agglutinere partikler antigener, Men IgM, på grunn av sin høye spesifisitet er en spesielt god agglutinin.

det er ingen agglutinering kan observeres når konsentrasjonen av antistoff er høy, (lavere fortynninger), og deretter prøven fortynnes, skjer agglutinering. Prozone effekt er definert som usynlighet av agglutinering ved høye konsentrasjoner av antistoffer. Det skyldes grunnen til at overskytende antistoff danner svært små komplekser som ikke klumper seg for å danne synlig agglutinering.

Kvalitativ agglutinasjonstest

Agglutinasjonstester kan brukes på en kvalitativ måte for å analysere tilstedeværelsen av et antigen eller et antistoff. Antistoffet blandes med partikkelantigenet og en positiv test indikeres ved agglutinering av partikkelantigenet.

for eksempel, for å bestemme pasientens blodtype, kan de røde blodcellene til personen blandes med antistoff mot et blodgruppeantigen. Et annet eksempel er at for å analysere tilstedeværelsen av antistoffer i en pasientprøve, blandes pasientens serum med røde blodlegemer (RBC) av en kjent blodtype.

Kvantitativ agglutinasjonstest

for å måle nivået av antistoffer mot partikkelantigener, kan agglutinasjonstest bli mye brukt. For denne testen kan serielle fortynninger av prøven gjøres og den testes for antistoff. Deretter kan en fast mengde partikkel antigen eller bakterier eller røde blodlegemer legges til det. Bestem maksimal fortynning som danner agglutinering, og denne maksimale fortynningen som gir observerbar agglutinering er kjent som titer. Resultatene er vist som gjensidig av maksimal fortynning som danner synlig agglutinering.

Passiv Hemagglutinering

følsomheten og enkelheten til agglutineringsreaksjoner kan utvides til oppløselige antigener ved teknikken for passiv heme agglutinering. I denne teknikken fremstilles antigenbelagte røde blodlegemer ved å blande et løselig antigen med røde blodlegemer som har blitt behandlet med tannsyre eller kromklorid, som begge fremmer adsorpsjon av antigen til overflaten av cellene. Det er imidlertid mulig å belegge erytrocytter med et oppløselig antigen (f. eks.. viralt antigen, et polysakkarid eller en hapten) og bruk de belagte røde blodcellene i en agglutinasjonstest for antistoff mot det oppløselige antigenet.

Serielt fortynnet serum som inneholder antistoff, lastes til hver brønn i mikrotiterplaten, etter at antigen-belagte røde blodlegemer påføres hver brønn. Det karakteristiske mønsteret av agglutinerte røde blodlegemer på brønnene brukes som et verktøy for å analysere agglutineringsreaksjonene. Hvis antigenet er partikkelformet, kan antigenet reagere med antistoffet i serum og resulterer i klumping av antigen som viser et positivt resultat.

I løpet av de siste årene har det vært et skifte fra røde blodlegemer til syntetiske partikler, som latexperler. Preparatet kan enten brukes umiddelbart eller lagres til senere bruk. Bruken av syntetiske perler gir fordelene med konsistens, ensartethet og stabilitet. Videre agglutinering reaksjoner ansette syntetiske perler kan leses raskt, ofte innen 3 til 5 minutter av blande perlene med prøven. Enten basert på røde blodlegemer eller de mer praktiske og allsidige syntetiske perlene, er agglutineringsreaksjoner enkle å utføre, krever ikke dyrt utstyr, og oppdager liten mengde antistoff ( konsentrasjoner så lave som nanogram per milliliter).

det første trinnet i testen er å knytte sammen latexpartikkelen av antistoffmolekylene som spesifikt fester seg til de antigeniske determinanter på overflaten av partiklene. Det er en dannelse av store gitter gjennom disse kryssforbindelsene, og disse store gitter sedimenter lett på grunn av den store størrelsen på klumper og er synlige for det blotte øye i løpet av minutter. Graden av agglutinering kan bestemmes ved å plotte den aggutinante konsentrasjonen som gir en klokkeformet kurve. Antigen-antistoffkompleksene kan forstørres ved hjelp av latexpartiklene. Mange av latexagglutinasjonstestene utføres manuelt og oppdages ved visuell observasjon. For å bestemme agglutinering må det inneholde ca 100 klumper, og disse klumpene må være på ca 50 mikrometer i størrelse for å bli sett med øyet.

Agglutineringshemming Reaksjoner

hvis antistoffet inkuberes med antigen før blanding med lateks, hemmes agglutineringen. Ved agglutineringshemming er fraværet av agglutinering diagnostisk av antigen, gir en høy sensitiv analyse for små mengder antigen. For eksempel hjem graviditet kits inneholde humant choriongonadotropin (HCG hormon) belagt latex partikkel og antistoff TIL HCG. En gravid kvinne urin inneholder HCG som utskilles av den utviklende placenta etter befruktning. Tilsetningen av urin som inneholder HCG, hemmer agglutinering av latexpartikler når ANTI-HCG-antistoffet er tilsatt; og dermed er graviditeten indisert ved fravær av agglutinering.

Latexpartiklene

Emulsjonspolymerisering er prosedyren som brukes til fremstilling av latexpartikler. For det første blandes styren med overflateaktivt middel (natriumdodecylsulfat) – løsningen, danner en milliard emulgerte miceller som er i jevn diameter. Deretter tilsettes en liten mengde kaliumpersulfat til det som er en vannløselig polymerisasjonsinitiator. Når polymerisasjonsprosessen er ferdig, arrangeres polystyrenkjedene i micellene. Hydrokarbondelen av polystyrenkjeden er festet til midten og den terminale sulfationen til sfærens overflate som er utsatt for vannfasen. Andre hydrokarboner og dets derivater brukes også til produksjon av de ensartede latexpartiklene, noen av eksemplene er stryren-dlvinylbenzen, polymetylmetakrylat, styrenvinyltoluen, polyvinyltoluen etc.

prosessen med latekspartikkelproduksjon er utviklet fra syntetisk gummi produksjon og også emulsjonen har et melkeaktig utseende, begrepet latex er gitt til den .Den ønskede diameteren av latexpartikkelen kan gjøres ved å modifisere prosessen med fremstilling, hydrokarboner, overflateaktive stoffer og initiatoren. Partikkelstørrelsen på latexer varierer vanligvis mellom 0.05 µ til 2µ. På grunn av tilstedeværelsen av sulfat – og sulfonationer på overflaten av partikkelen som gir en iboende negativ overflateladning til partikkelen.

latekspartiklene kan funksjonaliseres og overflatebehandles for å lette bindingsstabiliteten og for å øke analyttfestet. Funksjonelle behandlinger som amidering, aminering, karboksylering, hydroksylering og jevn magnetisering brukes til å øke egenskapene til latexpartikler. Også forskjellige farger av latexpartikler er tilgjengelige kommersielt som letter den visuelle avlesningen.

latex agglutinasjonstesten er en klinisk metode for å oppdage visse antigener eller antistoffer i en rekke kroppsvæsker som blod, spytt, urin eller cerebrospinalvæske. Prøven som skal testes, sendes til laboratoriet og hvor den blandes med latexperler belagt med et bestemt antigen eller antistoff. Klumpingen av latexperler (agglutinering) indikerer tilstedeværelsen av mistenkte partikler.

Latex agglutinasjonstest inneholder noen av fordelene .De er,

1. Evne til å oppnå semi kvantitative resultater.
2. En lav individuell testkostnad.
3. Relativt kort tid for å oppnå resultater.

ved å utføre 2-til 10-fold fortynninger av prøver kan vi få semi kvantitative resultater .Latex agglutinasjonstest har noen ulemper også som inkluderer

1.Må nøye tolke marginale resultater og
2. Problemer med spesifisitet på grunn av forstyrrende stoffer i mange analyser.