doelstelling

het leren van de techniek van latexagglutinatie.

Latexagglutinatie wordt waargenomen wanneer een monster dat het specifieke antigeen (of antilichaam) bevat, wordt gemengd met een antilichaam (of antigeen) dat bedekt is op het oppervlak van latexdeeltjes.

in klinische laboratoria voor de opsporing van infectieziekten werden latexagglutinatietests uitgevoerd en in 1956 beschreven Singer en Plotz voor het eerst Reumatofactortest, een test op basis van latexagglutinatie. Bij reumatoïde artritis (RA) reageren IgG-antilichamen geproduceerd door lymfocyten in het synoviale gewricht met de IgM-antilichamen (RF, reumatoïde factor) om immuuncomplexen te genereren die het complement activeren en de weefselvernietiging veroorzaken. De RA is van diagnostische betekenis.Sindsdien zijn tests voor het opsporen van microbiële en virale infecties, auto-immuunziekten, hormonen, geneesmiddelen en serumeiwitten door veel bedrijven wereldwijd ontwikkeld en op de markt gebracht. Het principe wordt gebruikt voor het diagnosticeren van veel infecties zoals Hepatitis B, H. influenzae, N. meningitidis, enz.. Alle methodes om antigeen of antilichaam te ontdekken of te kwantificeren profiteren van het feit dat zij reageren om complex te vormen. Bij de optimale antigeen-antilichaam concentratie, dit complex precipiteert uit. Nochtans, als het antigeen deeltjesachtig van aard is, wordt agglutinatie van antigeen-antilichaam complex waargenomen.

Agglutinatiereacties

de reactie tussen een deeltjesantigeen en een antilichaam resulteert in zichtbare klontering die agglutinatie wordt genoemd. Antilichamen die dergelijke reacties produceren staan bekend als agglutininen. Het principe van Agglutinatiereacties is vergelijkbaar met precipitatiereacties; ze zijn afhankelijk van de kruisverbinding van polyvalente antigenen. Wanneer het antigeen een erytrocyt is, wordt het hemagglutinatie genoemd.Theoretisch kunnen alle antilichamen corpusculaire antigenen agglutineren, maar IgM, vanwege zijn hoge specificiteit is een bijzonder goede agglutinine.

er kan geen agglutinatie worden waargenomen wanneer de antilichaamconcentratie hoog is (lagere verdunningen), en vervolgens het monster wordt verdund, agglutinatie optreedt. Prozone-effect wordt gedefinieerd als de onzichtbaarheid van agglutinatie bij hoge concentraties antilichamen. Het is te wijten aan de reden dat overtollig antilichaam zeer minuscule complexen vormt die niet klonteren om zichtbare agglutinatie te vormen.

kwalitatieve agglutinatietest

Agglutinatietests kunnen op kwalitatieve wijze worden gebruikt om de aanwezigheid van een antigeen of een antilichaam te bepalen. Het antilichaam wordt gemengd met het deeltjesantigeen en een positieve test wordt aangegeven door de agglutinatie van het deeltjesantigeen.

bijvoorbeeld, om het bloedtype van de patiënt te bepalen kunnen de rode bloedcellen van de persoon met antilichaam tegen een antigeen van de bloedgroep worden gemengd. Een ander voorbeeld is dat om de aanwezigheid van antilichamen in een geduldige steekproef te analyseren, het serum van de patiënt met de rode bloedcel (RBC) van een gekend bloedtype wordt gemengd.

kwantitatieve agglutinatietest

om het gehalte aan antilichamen tegen deeltjesantigenen te meten, kan agglutinatietest op grote schaal worden gebruikt. Voor deze test, kunnen de periodieke verdunningen van de steekproef worden gemaakt en het voor antilichaam wordt getest. Dan kan een vaste hoeveelheid deeltjesantigeen of bacteriën of rode bloedcellen aan het worden toegevoegd. Bepaal de maximale verdunning die agglutinatie vormt en deze maximale verdunning die waarneembare agglutinatie oplevert, wordt de titer genoemd. De resultaten worden weergegeven als de wederkerigheid van de maximale verdunning die zichtbare agglutinatie vormt.

passieve hemagglutinatie

de gevoeligheid en eenvoud van agglutinatiereacties kunnen worden uitgebreid tot oplosbare antigenen door de techniek van passieve heemagglutinatie. In deze techniek, wordt het antigeen met een laag bedekte rode bloedcellen bereid door oplosbaar antigeen met rode bloedcellen te mengen die met looizuur of chromiumchloride zijn behandeld, die beide adsorptie van antigeen aan de oppervlakte van de cellen bevorderen. Het is echter mogelijk om erytrocyten te coaten met een oplosbaar antigeen (bijv.. viraal antigeen, een polysaccharide of een hapten) en gebruik de gecoate rode bloedcellen in een agglutinatietest voor antilichamen tegen het oplosbare antigeen.

serieel verdund serum dat antilichamen bevat, wordt in elk putje van de microtiterplaat geladen, waarna op elk putje met antigeen gecoate rode bloedcellen worden aangebracht. Het karakteristieke patroon van verkleefde rode bloedcellen op de putten wordt gebruikt als een hulpmiddel voor het testen van de agglutinatiereacties. Als het antigeen deeltjesachtig is, dan kan het antigeen met het antilichaam in het serum reageren en resulteert in het samenklonteren van antigeen dat een positief resultaat toont.

de afgelopen jaren is er een verschuiving geweest van rode bloedcellen naar synthetische deeltjes, zoals latexparels. Het preparaat kan onmiddellijk worden gebruikt of voor later gebruik worden bewaard. Het gebruik van synthetische kralen biedt de voordelen van consistentie, uniformiteit en stabiliteit. Bovendien kunnen agglutinatiereacties met behulp van synthetische parels snel worden afgelezen, vaak binnen 3 tot 5 minuten na het mengen van de parels met het testmonster. Of op basis van rode bloedcellen of de meer handige en veelzijdige synthetische parels, agglutinatiereacties zijn eenvoudig uit te voeren, vereisen geen dure apparatuur en detecteren kleine hoeveelheid antilichaam ( concentraties zo laag als nanogrammen per milliliter).

de eerste stap in de test is het aan elkaar koppelen van het latexdeeltje door de antilichaammoleculen die zich specifiek hechten aan de antigene determinanten op het oppervlak van de deeltjes. Er is een vorming van grote roosters door deze dwarsverbindingen en deze grote roosters sediment gemakkelijk te wijten aan de grote omvang van klontjes en zijn zichtbaar voor het blote oog binnen enkele minuten. De agglutinatiegraad kan worden bepaald door de aggutinantconcentratie uit te zetten die een klokvormige kromme geeft. De antigeen-antilichaamcomplexen kunnen worden vergroot gebruikend de latexdeeltjes. Veel van de latex agglutinatie testen worden handmatig uitgevoerd en gedetecteerd door visuele observatie. Om agglutinatie te bepalen moet er ongeveer 100 klontjes bevatten, en deze klontjes moeten ongeveer 50 micrometer groot zijn om door het oog te worden gezien.

Agglutinatieremmingsreacties

als het antilichaam wordt geïncubeerd met antigeen voordat het met latex wordt gemengd, wordt agglutinatie geremd; dit komt omdat er geen vrije antilichamen beschikbaar zijn voor agglutinatie. Bij agglutinatieremming is de afwezigheid van agglutinatie kenmerkend voor antigeen, biedt een hooggevoelige analyse voor kleine hoeveelheden antigeen. Bijvoorbeeld thuis zwangerschap kits bevatten humaan choriongonadotrofine (HCG hormoon) gecoate latex deeltje en antilichaam tegen HCG. Een zwangere vrouw urine bevatten HCG die wordt uitgescheiden door de zich ontwikkelende placenta na bevruchting. De toevoeging van urine die HCG bevat, remt agglutinatie van latexdeeltjes wanneer het anti-HCG-antilichaam wordt toegevoegd; en dus wordt de zwangerschap aangegeven door de afwezigheid van agglutinatie.

de latexdeeltjes

emulsiepolymerisatie is de procedure die wordt toegepast voor de bereiding van latexdeeltjes. Ten eerste wordt het styreen gemengd met de oplossing van de oppervlakteactieve stof (natriumdodecylsulfaat), vormt miljarden geëmulgeerde micellen die in uniforme diameter zijn. Dan wordt een kleine hoeveelheid kaliumpersulfaat toegevoegd aan het die een in water oplosbare polymerisatie-initiator is. Wanneer het polymerisatieproces is voltooid, worden de polystyreenkettingen in de micellen geplaatst. Het koolwaterstofdeel van de polystyreenketting is verbonden aan het centrum en het eindsulfaat-ion aan het bollenoppervlak dat aan de waterfase wordt blootgesteld. Andere koolwaterstoffen en derivaten daarvan worden ook gebruikt voor de productie van de uniforme latexdeeltjes, enkele voorbeelden zijn stryreen-dlvinylbenzeen, polymethylmethacrylaat, styreen vinyltolueen, polyvinyltolueen enz.

het proces van de productie van latexdeeltjes wordt geëvolueerd uit de productie van synthetische rubber en ook de emulsie heeft een melkachtig uiterlijk, de term latex wordt eraan gegeven .De gewenste diameter van latexdeeltje kan worden gemaakt door het proces van voorbereiding, koolwaterstoffen, de oppervlakteactieve stoffen en de initiator te wijzigen. De deeltjesgrootte van latexen is gewoonlijk waaiers tussen 0.05 µm aan 2µm. Vanwege de aanwezigheid van sulfaat-en sulfonaationen op het oppervlak van het deeltje dat een inherente negatieve oppervlaktelading aan het deeltje biedt.

de latexdeeltjes kunnen worden gefunctionaliseerd en aan het oppervlak worden behandeld om de bindingsstabiliteit te vergemakkelijken en de analythechting te vergroten. Functionele behandelingen zoals amidatie, aminatie, carboxylatie, hydroxylatie en zelfs magnetisatie worden gebruikt om de eigenschappen van latexdeeltjes te verhogen. Ook zijn er verschillende kleuren latexdeeltjes in de handel verkrijgbaar die de visuele uitlezing vergemakkelijken.

de latexagglutinatietest is een klinische methode om bepaalde antigenen of antilichamen op te sporen in verschillende lichaamsvloeistoffen zoals bloed, speeksel, urine of cerebrospinale vloeistof. Het te testen monster wordt verzonden naar het laboratorium en waar het gemengd met latex parels met een laag bedekt met een specifiek antigeen of antilichaam. Het samenklonteren van latex parels (agglutinatie) wijst op de aanwezigheid van verdachte deeltjes.

de latexagglutinatietest omvat enkele van de voordelen .Zij zijn,

1. Vermogen om semi-kwantitatieve resultaten te verkrijgen.
2. Een lage individuele testkosten.
3. Relatief korte tijd om resultaten te verkrijgen.

door 2-tot 10-voudige verdunningen van monsters kunnen we de semi-kwantitatieve resultaten verkrijgen .Latex agglutinatie test hebben een aantal nadelen ook die omvatten

1.Noodzaak om marginale resultaten zorgvuldig te interpreteren en
2. Problemen met specificiteit als gevolg van storende stoffen in veel tests.