Giemsa vlek-Principe, Procedure, resultaten, interpretatie

BY admin
|
Biology Educational Videos

laatst bijgewerkt op 5 februari 2020 door Sagar Aryal

Inleiding

Giemsa stain was een naam die werd aangenomen door een Duitse scheikundige, voor zijn toepassing van een combinatie van reagentia in het aantonen van de aanwezigheid van parasieten in malaria.

het behoort tot een groep vlekken bekend als Romanowsky vlekken. Dit zijn neutrale vlekken samengesteld uit een mengsel van geoxideerd methyleenblauw, azuurblauw en eosine Y en ze uitgevoerd op een luchtgedroogde dia die is post-fixed met methanol. Romanowsky vlekken worden toegepast in de differentiatie van cellen, pathologische onderzoeken van monsters zoals bloed en beenmerg films en demonstratie van parasieten bijvoorbeeld malaria. Er zijn vier soorten Romanoswsky vlekken:

  • Giemsa vlek
  • Jenner Vlek
  • Wright vlek
  • May-Grunwald Vlek
  • Leishman vlek

Doelstellingen van Giemsa vlek

  • Om nauwkeurig te bereiden op de Giemsa vlek stock oplossing
  • Om vlekken en identificeren bloedcellen
  • Te onderscheiden bloedcellen kernen van het cytoplasma

Principe

Giemsa vlek is een gouden standaard kleuring techniek die wordt gebruikt voor dunne en dikke strepen te onderzoeken bloed voor malaria parasieten, een routine check-up voor andere bloedparasieten en om morfologisch het nucleaire en cytoplasma van erytrocyten, leukocyten en bloedplaatjes en parasieten te differentiëren.

zoals elk type Romanowsky-kleurstof, bestaat het uit zowel de zure als de basische kleurstoffen, in relatie tot de zuurgraad en de basiciteit van bloedcellen. Azuurblauw en methyleenblauw, bindt een basiskleurstof aan de zuurkern en produceert blauwpaarse kleur. Eosin is een zure kleurstof die tot het cytoplasma en cytoplasmic korrels wordt aangetrokken die alkalisch-producerende rode kleuring zijn. De vlek moet worden gebufferd met water tot pH 6,8 of 7.2, om de kleurstoffen neer te slaan om eenvoudige materialen te binden.

Klassiek is Giemsa-kleuring een differentiële kleuring die bestaat uit een combinatie van reagentia (azuurblauw, methyleenblauw en eosine-kleurstof) die op grote schaal wordt gebruikt in de cytogenetica en histopathologie voor de diagnose van:

  1. Malaria, spirochetes en andere bloed parasieten
  2. Chlamydia trachomatis inclusion bodies
  3. Borrelia spp
  4. Yersinia pestis
  5. Histoplasma spp
  6. Pneumocystis jiroveci cysten

Reagentia Gebruikt

  • Methanol
  • Giemsa poeder
  • Glycerine
  • Water (Buffer)

Procedure

Voorbereiding van de Giemsa Vlek Stock oplossing (500 ml)

  1. In 250 ml methanol, voeg 3,8 g van Giemsa poeder en te ontbinden.Verhit de oplossing tot ~60oC
  2. voeg vervolgens langzaam 250 ml glycerine toe aan de oplossing.Filtreer de oplossing en laat deze voor gebruik 1-2 maanden staan.

bereiding van de werkoplossing

  1. 10 ml stamoplossing toevoegen aan 80 ml gedestilleerd water en 10 ml methanol

kleuring procedure 1: dunne Film kleuring

  1. maak op een schone, droge microscopische glasplaat een dunne film van het monster (bloed) en laat het aan de lucht drogen.
  2. dompel het uitstrijkje (2-3 dips) in zuivere methanol voor fixatie van het uitstrijkje, laat het gedurende 30seconden aan de lucht drogen
  3. vul het objectglaasje met 5% Giemsa-vlekoplossing gedurende 20-30 minuten.
  4. spoelen met leidingwater en laten drogen

opmerking: in noodgevallen, laat de Giemsa-vlekoplossing gedurende 5-10 minuten

kleuring Procedure 2: Dikke Film kleuring

  1. voeg een dikke uitstrijkje bloed toe en laat 1 uur aan de lucht drogen op een kleuringrek.
  2. Dompel het dikke bloeduitstrijkje in verdunde Giemsa-vlek (bereid door 1 ml van de stamoplossing te nemen en 49 ml fosfaatbuffer of gedestilleerd water toe te voegen, maar de resultaten kunnen verschillen).
  3. was het uitstrijkje door 3-5 minuten in gebufferd water gedestilleerd water te dompelen
  4. laat het drogen

resultaten

het cytoplasma en het cytoplasmatische granulaat van bloedcellen zijn rood van kleur, terwijl de kern blauwpaars van kleur is.

de erytrocyten zullen roze lijken in kleur

  • eosinofielen zullen een blauwpaarse kern, een lichtroze cytoplasma en oranjerode korrels hebben.
  • neutrofielen verschijnen paars-rode kern en een roze cytoplasma.
  • basofielen hebben een paarse kern en blauwachtige korrels.
  • lymfocyten hebben een donkerblauwe kern en een lichtblauw cytoplasma.
  • monocyten hebben een paarse kern en een roze cytoplasma.
  • bloedplaatjes hebben paarse korrels.

Giemsa Stain-Principle, Procedure, Results, Interpretation

Image Source: Wikipedia

Interpretation

Azure and methyleen blue, a basic dye binding to the acid nucleus producing blue-purple color. Eosin is een zure kleurstof die tot het cytoplasma en cytoplasmic korrels wordt aangetrokken die alkalisch-producerend rood-oranje kleuring zijn.

toepassingen Giemsa-vlek

  1. Giemsa-vlek is specifiek voor de fosfaatgroepen van DNA. Het hecht zich aan gebieden van DNA met hoge hoeveelheden adenine-thymine binding.
  2. Giemsa-vlek wordt gebruikt in Giemsa-banding (G-banding), om chromosomen te bevlekken en wordt vaak gebruikt om een diagrammatische representatie van chromosomen (idiogram) te creëren.
  3. omdat het een differentiële vlek is, kan Giemsa-vlek worden gebruikt om de hechting van pathogene bacteriën aan menselijke cellen te bestuderen, waarbij menselijke cellen worden onderscheiden als paarse en bacteriële cellen als roze.
  4. het kan worden gebruikt voor de histopathologische diagnose van malaria en sommige spirocheten en protozoaire bloedparasieten.
  5. het wordt ook gebruikt in wolbachs weefselvlek i.e kleuring hematopoietisch weefsel en voor de identificatie van bacteriën en rickettsia
  6. Giemsa-kleuring is een klassieke bloedfilm-kleuring voor perifere bloeduitstrijkjes en beenmergmonsters. Rode bloedcellen vlekken roze, bloedplaatjes vlekken een licht licht roze, lymfocyt cytoplasma vlekken hemelsblauw, monocyt cytoplasma vlekken lichtblauw, en leukocyt nucleaire chromatine vlekken magenta.
  7. Giemsa-vlek wordt ook gebruikt om chromosomen te visualiseren, chromosomale anomalieën zoals translocatie en herschikking te identificeren,
  8. Giemsa-vlekken op de schimmel Histoplasma, Chlamydia-bacteriën, en kan worden gebruikt om mestcellen te identificeren.

voordelen

  • gemakkelijk verkrijgbaar, gemakkelijk te bereiden, te onderhouden en te gebruiken

beperkingen

  • Working Giemsa stain moet kort voor gebruik worden bereid.
  1. kleuring technieken: Giemsa door Kathleen P Freeman, Karen l Gerber: Vetstream
  2. paramedische wereld; Hematologie Practica/Giemsa kleuring Techniek
  3. Hoe Romanowsky vlekken werk en waarom ze blijven waardevol – met inbegrip van een voorgesteld universele Romanowsky vlekken mechanisme en een rationele probleemoplossing regeling door Horobin RW./ncbi.nlm.nih.gov

Internet-Bronnen

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK