TUNEL kleuring en de Tunel assay
Gao Y et al. gebruikte de assayuitrusting ab206386 van HRP-DAB TUNEL om weefselsecties van muizenovaria te analyseren. A. sectie behandeld met DNase I als positieve controle. negatieve controle zonder TDT-enzym. C en f. representatieve experimentele beelden. Kernen gekleurd met de TUNEL assay zijn bruin. De secties werden met Methylgroen tegengewerkt.
voor-en nadelen van TUNEL kleuring methoden
TUNEL kleuring / TUNEL assay protocollen die gebruik maken van een nucleotide direct gelabeld met een fluorescerende kleurstof zijn sneller dan indirecte methoden, die gebruik maken van een antilichaam of een streptavidine-biotine complex, omdat ze minder kleuring stappen vereisen.
methoden die gebaseerd zijn op met biotine gelabelde nucleotiden kunnen baat hebben bij de versterking van het streptavidine-biotinecomplex. Zij vereisen extra blokkerende stappen om endogeen biotine te neutraliseren en achtergrondkleuring te verminderen, hoewel deze voor alle onderzoekers gemeenschappelijk zijn die traditionele chromogene immunohistochemie uitvoeren.
BrdU-gebaseerde methoden kunnen ook een helderder signaal produceren omdat BrdU doorgaans gemakkelijker wordt opgenomen door het TDT-enzym.
de relatieve populariteit van TUNEL kleuring/Tunel assay methods
een overzicht van 50 research papers gepubliceerd in 2017 met de term “TUNEL Assay” of “TUNEL kleuring”, bleek dat:
– 50% van het papier dat gebruikt wordt dUTP direct toegevoegd aan FITC
– 15% gebruikt biotine-dUTP en streptavidin-HRP
– 15% gebruikt FITC-dUTP en een anti-FITC-geconjugeerd antilichaam aan HRP
– 12% gebruikt digoxygenin-dUTP, en een anti-digoxygenin antilichaam toegevoegd aan een fluorescente kleurstof of HRP
– 8% gebruikt Br-dUTP en een anti-BrdU-antilichaam toegevoegd aan een fluorescente kleurstof
Alle papieren ondervraagden gebruikt de TUNEL gehalte in imaging plaats van flowcytometrie. Waar HRP werd gebruikt, werd schar substraat toegevoegd om een bruine vlek te creëren. Meer dan 90% van de research papers gebruikt een kit voor TUNEL kleuring.