Northern blot

en northernblot er en laboratoriemetode, der anvendes til at detektere specifikke RNA-molekyler blandt blanding af RNA. Northern blotting kan bruges til at analysere en prøve af RNA fra apartikulært væv eller celletype for at måle RNA-ekspressionen af særlige gener. Denne metode blev opkaldt efter dens lighed med teknikkenkendt som en sydlig blot.

det første trin i en nordlig plet er at denaturere eller adskille RNA ‘ et inden for prøven i enkelte tråde, hvilket sikrer, at strengene udfoldes, og at der ikke er nogen binding mellem tråde. RNA-molekylerne adskilles såifølge deres størrelser ved hjælp af en metode kaldet gelelektroforese. Følgendeadskillelse overføres RNA fra gelen til en blottende membran.(Selvom dette trin er det, der giver teknikken navnet”northern blotting”, bruges udtrykket typisk til at beskrive hele proceduren.) Når overførslen er færdig, bærer blottingmembranen alle RNA-båndene oprindeligt pågelen. Dernæst behandles membranen med et lille stykke DNA eller RNA kaldet sonde, som er designet til at have en sekvens, der er komplementær til apartikulær RNA-sekvens i prøven; dette gør det muligt for sonden at hybridisere, orbind, til et specifikt RNA-fragment på membranen. Derudover har sonden alabel, som typisk er et radioaktivt atom eller et fluorescerende farvestof. Efter hybridisering tillader sonden således RNA-molekylet af interesse at blive detekteret blandt de mange forskellige RNA-molekyler på membranen.