cel

aby nauczyć się techniki aglutynacji lateksowej.

aglutynację lateksową obserwuje się, gdy próbka zawierająca specyficzny antygen (lub przeciwciało) jest mieszana z przeciwciałem (lub antygenem) pokrytym na powierzchni cząstek lateksu.

testy aglutynacji lateksowej zostały zastosowane w laboratoriach klinicznych do wykrywania chorób zakaźnych i w 1956 roku Singer i Plotz po raz pierwszy opisali Test czynnika reumatoidalnego, test oparty na aglutynacji lateksowej. W reumatoidalnym zapaleniu stawów (RZS) przeciwciała IgG wytwarzane przez limfocyty w stawie maziowym reagują z przeciwciałami IgM (RF, czynnik reumatoidalny) w celu wytworzenia kompleksów immunologicznych, które aktywują dopełniacz i powodują zniszczenie tkanek. RZS ma znaczenie diagnostyczne.

od tego czasu testy do wykrywania infekcji bakteryjnych i wirusowych, chorób autoimmunologicznych, hormonów, leków i białek surowicy zostały opracowane i wprowadzone na rynek przez wiele firm na całym świecie. Zasada ta jest stosowana do diagnozowania wielu infekcji, takich jak wirusowe zapalenie wątroby typu B, H. influenzae, N. meningitidis itp.. Wszystkie metody wykrywania lub ilościowego antygenu lub przeciwciała skorzystać z faktu, że reagują tworząc kompleks. Przy optymalnym stężeniu antygen-przeciwciało kompleks ten wytrąca się. Jeśli jednak antygen ma charakter cząsteczkowy, obserwuje się aglutynację kompleksu antygen-przeciwciało.

reakcje aglutynacji

reakcja między cząsteczkowym antygenem a przeciwciałem powoduje widoczne zlepianie zwane aglutynacją. Przeciwciała, które wywołują takie reakcje, są znane jako aglutyniny. Zasada reakcji aglutynacji jest podobna do reakcji strącania; zależą one od sieciowania antygenów wielowartościowych. Gdy antygen jest erytrocytem, nazywa się to hemaglutynacją.Teoretycznie wszystkie przeciwciała mogą aglutynować antygeny cząsteczkowe, ale IgM, ze względu na swoją wysoką swoistość jest szczególnie dobrą aglutyniną.

nie ma aglutynacji można zaobserwować, gdy stężenie przeciwciała jest wysokie (niższe rozcieńczenia), a następnie próbka jest rozcieńczana, następuje aglutynacja. Efekt Prozone definiuje się jako niewidzialność aglutynacji przy wysokich stężeniach przeciwciał. Wynika to z tego, że nadmiar przeciwciał tworzy bardzo drobne kompleksy, które nie zlepiają się, tworząc widoczną aglutynację.

jakościowy test aglutynacji

testy aglutynacji można stosować w sposób jakościowy do oznaczania obecności antygenu lub przeciwciała. Przeciwciało miesza się z antygenem cząsteczkowym i dodatni wynik testu wskazuje aglutynacja antygenu cząsteczkowego.

na przykład, aby określić grupę krwi pacjenta, czerwone krwinki osoby mogą być mieszane z przeciwciałem przeciw antygenowi z grupy krwi. Innym przykładem jest to, że w celu oznaczenia obecności przeciwciał w próbce pacjenta, surowica pacjenta miesza się z krwinką czerwoną (RBC) o znanej grupie krwi.

ilościowy test aglutynacji

do pomiaru poziomu przeciwciał przeciwko antygenom cząsteczkowym można szeroko stosować test aglutynacji. Do tego badania można wykonać szeregowe rozcieńczenia próbki i bada się ją na obecność przeciwciał. Następnie można dodać do niego stałą ilość cząsteczkowego antygenu lub bakterii lub czerwonych krwinek. Określić maksymalne rozcieńczenie, które tworzy aglutynację, a to maksymalne rozcieńczenie, które daje obserwowalną aglutynację, jest znane jako miana. Wyniki przedstawiono jako odwrotność maksymalnego rozcieńczenia, które tworzy widoczną aglutynację.

Hemaglutynacja Bierna

wrażliwość i prostota reakcji aglutynacji można rozszerzyć na rozpuszczalne antygeny za pomocą techniki pasywnej aglutynacji hemu. W tej technice, powlekane antygenem czerwone krwinki Wytwarza się przez zmieszanie rozpuszczalnego antygenu z czerwonymi krwinkami, które zostały potraktowane kwasem garbnikowym lub chlorkiem chromu, z których oba promują adsorpcję antygenu na powierzchni komórek. Możliwe jest jednak powlekanie erytrocytów rozpuszczalnym antygenem (np.. antygen wirusowy, polisacharyd lub hapten) i wykorzystać powlekane czerwone krwinki w teście aglutynacji na przeciwciało do rozpuszczalnego antygenu.

seryjnie rozcieńczoną surowicę zawierającą przeciwciało ładuje się do każdej studzienki płytki mikrotitera, po czym do każdej studzienki nanosi się powlekane antygenem czerwone krwinki. Charakterystyczny wzór aglutynacji czerwonych krwinek na studzienkach jest używany jako narzędzie do oznaczania reakcji aglutynacji. Jeśli antygen jest cząsteczką, antygen może reagować z przeciwciałem w surowicy i powoduje zbrylanie antygenu, co pokazuje pozytywny wynik.

w ciągu ostatnich kilku lat nastąpiło odejście od czerwonych krwinek na rzecz cząstek syntetycznych, takich jak koraliki lateksowe. Preparat można zużyć natychmiast lub przechowywać do późniejszego użycia. Zastosowanie syntetycznych koralików oferuje zalety konsystencji, jednorodności i stabilności. Ponadto reakcje aglutynacji z użyciem syntetycznych kulek można odczytywać szybko, często w ciągu 3 do 5 minut od wymieszania kulek z próbką badaną. Niezależnie od tego, czy oparte są na czerwonych krwinkach, czy na wygodniejszych i bardziej wszechstronnych kulkach syntetycznych, reakcje aglutynacji są proste do wykonania, nie wymagają drogiego sprzętu i wykrywają niewielką ilość przeciwciał ( stężenia tak niskie, jak nanogramy na mililitr).

pierwszym etapem badania jest połączenie cząstki lateksu przez cząsteczki przeciwciała, które specjalnie przyłączają się do determinantów antygenowych na powierzchni cząstek. Przez te krzyżujące się ogniwa powstają duże sieci, a te duże sieci są łatwo widoczne ze względu na duże rozmiary kęp i są widoczne gołym okiem w ciągu kilku minut. Stopień aglutynacji można określić poprzez wykreślenie stężenia aggutynantiny, co daje krzywą w kształcie dzwonu. Kompleksy antygen-przeciwciało można powiększać za pomocą cząstek lateksu. Wiele testów aglutynacji lateksowej jest wykonywanych ręcznie i wykrywanych przez obserwację wzrokową. Aby określić aglutynację musi zawierać około 100 grudek, a te grudki muszą mieć rozmiar około 50 mikrometrów, aby były widoczne naocznie.

reakcje hamowania aglutynacji

jeśli przeciwciało jest inkubowane z antygenem przed zmieszaniem z lateksem, aglutynacja jest hamowana; dzieje się tak dlatego, że wolne przeciwciała nie są dostępne do aglutynacji. W hamowaniu aglutynacji brak aglutynacji jest diagnostyczny dla antygenu, zapewnia wysoką czułość testu dla małych ilości antygenu. Na przykład domowe zestawy ciążowe zawierają ludzką gonadotropinę kosmówkową (hormon HCG) powlekaną cząsteczką lateksu i przeciwciałem do HCG. Mocz kobiety w ciąży zawiera HCG, który jest wydzielany przez rozwijające się łożysko po zapłodnieniu. Dodanie moczu zawierającego HCG, hamuje aglutynację cząsteczek lateksu po dodaniu przeciwciała anty-HCG; a zatem ciąża jest wskazana brakiem aglutynacji.

cząstki lateksu

polimeryzacja emulsyjna jest procedurą stosowaną do wytwarzania cząstek lateksu. Po pierwsze styren miesza się z roztworem środka powierzchniowo czynnego (siarczan dodecylu sodu), tworząc miliardy emulgowanych Miceli o jednolitej średnicy. Następnie dodaje się do niego niewielką ilość nadsiarczanu potasu, który jest rozpuszczalnym w wodzie inicjatorem polimeryzacji. Po zakończeniu procesu polimeryzacji łańcuchy polistyrenu układają się w micele. Węglowodorowa część łańcucha polistyrenowego jest przymocowana do środka, a końcowy jon siarczanowy do powierzchni kuli, która jest wystawiona na działanie fazy wodnej. Inne węglowodory i ich pochodne są również używane do produkcji jednolitych cząstek lateksu, niektóre przykłady to stryren-dlwinylobenzen, polimetakrylan metylu, styren winyl toluen, poliwinyl toluen itp.

proces produkcji cząstek lateksu ewoluował z produkcji kauczuku syntetycznego, a także emulsja ma mleczny wygląd, nadano jej termin Lateks.Żądaną średnicę cząstek lateksu można uzyskać poprzez modyfikację procesu przygotowania, węglowodorów, środków powierzchniowo czynnych i inicjatora. Wielkość cząstek lateksów wynosi zwykle od 0,05 µm do 2µm. Ze względu na obecność jonów siarczanowych i sulfonianowych na powierzchni cząstki, która zapewnia nieodłączny ujemny ładunek powierzchniowy cząstki.

cząstki lateksu można funkcjonalizować i obrabiać powierzchniowo, aby ułatwić stabilność wiązania i zwiększyć przyczepność analitu. Zabiegi funkcjonalne, takie jak amidacja, aminacja, karboksylacja, hydroksylacja, a nawet namagnesowanie stosuje się w celu zwiększenia właściwości cząstek lateksu. Dostępne są również różne kolory cząstek lateksu, które ułatwiają wizualny odczyt.

test aglutynacji lateksowej jest kliniczną metodą wykrywania pewnych antygenów lub przeciwciał w różnych płynach ustrojowych, takich jak krew, ślina, mocz lub płyn mózgowo-rdzeniowy. Badana próbka jest wysyłana do laboratorium, gdzie miesza się ją z lateksowymi kulkami powleczonymi specyficznym antygenem lub przeciwciałem. Zbrylanie koralików lateksowych (aglutynacja) wskazuje na obecność podejrzanych cząstek.

Test aglutynacji lateksowej zawiera niektóre zalety .Są to,

1. Możliwość uzyskania wyników półilościowych.
2. Niski indywidualny koszt testu.
3. Stosunkowo krótki czas na uzyskanie wyników.

wykonując 2 – do 10-krotne rozcieńczenia próbek, możemy uzyskać wyniki półilościowe .Test aglutynacji lateksowej ma pewne wady, które obejmują również

1.Trzeba dokładnie zinterpretować wyniki marginalne i
2. Problemy ze swoistością spowodowane substancjami interferującymi w wielu testach.