Giemsa Stain – zasada, procedura, wyniki, interpretacja

BY admin
|
Biologia Filmy edukacyjne

Ostatnia aktualizacja luty 5, 2020 przez Sagar Aryal

wprowadzenie

Giemsa stain to nazwa przyjęta od niemieckiego chemika, dla jego zastosowania kombinacji odczynników w wykazaniu obecności pasożytów w malarii.

należy do grupy plam znanych jako plamy Romanowskiego. Są to neutralne plamy składające się z mieszaniny utlenionego błękitu metylenowego, błękitu i eozyny Y i wykonywane na wysuszonym na powietrzu szkiełku, który jest po utrwaleniu metanolem. Plamy Romanowskiego stosuje się w różnicowaniu komórek, badaniach patologicznych próbek krwi i szpiku kostnego oraz wykazywaniu pasożytów np. malarii. Istnieją cztery rodzaje plam Romanoswskich:

  • bejca Giemsa
  • Bejca Giemsa
  • Bejca Wright
  • Bejca maj-Grunwald
  • bejca Giemsa

  • aby dokładnie przygotować roztwór podstawowy bejcy Giemsa
  • aby zabarwić i zidentyfikować komórki krwi
  • aby odróżnić jądra komórek krwi od cytoplazmy

zasada

Giemsa stain to złota standardowa technika barwienia, która jest używana zarówno do cienkich, jak i grubych rozmazów do badania krwi na pasożyty malarii, rutynowa kontrola dla innych pasożytów krwi i morfologicznie różnicować jądro i cytoplazmę erytrocytów, leukocytów i płytek krwi oraz pasożytów.

jak każdy rodzaj plam Romanowsky ’ ego, składa się zarówno z barwników kwasowych, jak i zasadowych, w odniesieniu do powinowactwa kwasowości i zasadowości dla komórek krwi. Lazur i błękit metylenowy, podstawowy barwnik wiąże się z jądrem kwasu, wytwarzając niebiesko-fioletowy kolor. Eozyna jest kwaśnym barwnikiem, który jest przyciągany do cytoplazmy i granulek cytoplazmatycznych, które wytwarzają czerwone zabarwienie alkaliczne. Plamę należy buforować wodą do pH 6,8 lub 7.2, aby wytrącić barwniki w celu związania prostych materiałów.

klasycznie, Giemsa stain jest różniczkową plamą, która składa się z kombinacji odczynników (Lazur, błękit metylenowy i barwnik eozyny) stosowanych szeroko w cytogenetyce i histopatologii do diagnostyki:

  1. Malaria, krętki i inne pasożyty krwi
  2. ciała włączające Chlamydia trachomatis
  3. Borrelia spp
  4. Yersinia pestis
  5. Histoplasma spp
  6. Pneumocystis jiroveci cysts

  • metanol
  • proszek Giemsa
  • gliceryna
  • woda (Bufor)

procedura

przygotowanie roztworu podstawowego bejcy Giemsa (500ml)

  1. do 250 ml metanolu dodać 3,8 g proszku Giemsa i rozpuścić.
  2. podgrzać roztwór do ~60oC
  3. następnie dodać powoli 250 ml gliceryny do roztworu.
  4. przefiltruj roztwór i pozostaw go na około 1-2 miesiące przed użyciem.

przygotowanie roztworu roboczego

  1. dodaj 10 ml roztworu podstawowego do 80 ml wody destylowanej i 10 ml metanolu

procedura barwienia 1: barwienie cienką warstwą

  1. na czystym, suchym szkiełku mikroskopowym wykonaj cienką warstwę próbki (krew) i pozostaw do wyschnięcia na powietrzu.
  2. zanurz rozmaz (2-3 dipy) w czystym metanolu w celu utrwalenia rozmazu, pozostaw do wyschnięcia na powietrzu przez 30 sekund
  3. zalej szkiełko 5% roztworem bejcy Giemsa na 20-30 minut.
  4. przepłukać wodą z kranu i pozostawić do wyschnięcia

uwaga: w nagłych przypadkach pozostaw roztwór bejcy Giemsa na 5-10 minut

procedura barwienia 2: barwienie grubą warstwą

  1. Dodaj gęsty rozmaz krwi i wysusz na powietrzu przez 1 godzinę na stojaku do barwienia.
  2. zanurz gęsty rozmaz krwi w rozcieńczonej plamie Giemsa(przygotowanej przez pobranie 1 ml roztworu podstawowego i dodanie do 49 ml buforu fosforanowego lub wody destylowanej, ale wyniki mogą być różne).
  3. przemyć rozmaz zanurzając go w buforowanej wodzie destylowanej przez 3-5 minut
  4. pozostawić do wyschnięcia

wyniki

cytoplazma i cytoplazmatyczne granulki komórek krwi mają kolor czerwony, podczas gdy jądro ma Kolor Niebiesko-fioletowy.

erytrocyty pojawią się w kolorze różowym

  • eozynofile będą miały niebiesko-fioletowe jądro, bladoróżową cytoplazmę i pomarańczowo-czerwone granulki.
  • neutrofile pojawią się purpurowo-czerwone jądro i różową cytoplazmę.
  • bazofile będą miały purpurowe jądro i niebieskawe granulki.
  • limfocyty mają ciemnoniebieskie jądro i jasnoniebieską cytoplazmę.
  • monocyty mają fioletowe jądro i różową cytoplazmę.
  • płytki krwi będą miały fioletowe granulki.

Giemsa Stain-zasada, procedura, wyniki, interpretacja

źródło obrazu: Wikipedia

interpretacja

Lazur i błękit metylenowy, podstawowy barwnik wiąże się z jądrem kwasu, wytwarzając niebiesko-fioletowy kolor. Eozyna jest kwaśnym barwnikiem, który jest przyciągany do cytoplazmy i granulek cytoplazmatycznych, które są alkalicznymi barwnikami czerwono-pomarańczowymi.

zastosowania bejca Giemsa

  1. bejca Giemsa jest specyficzna dla grup fosforanowych DNA. Wiąże się z regionami DNA z dużą ilością wiązania adenino-tyminowego.
  2. Giemsa stain jest używany w Giemsa banding (g-banding), do barwienia chromosomów i jest często używany do tworzenia schematycznej reprezentacji chromosomów (idiogram).
  3. jako plama różnicowa, plama Giemsa może być używana do badania przyczepności bakterii chorobotwórczych do komórek ludzkich, różnicując komórki ludzkie jako fioletowe i komórki bakteryjne jako różowe.
  4. może być stosowany do diagnostyki histopatologicznej malarii i niektórych pasożytów krętków i pierwotniaków.
  5. jest również stosowany w tkance wolbacha I.e barwienie tkanki krwiotwórczej i do identyfikacji bakterii i rickettsia
  6. Giemsa stain to klasyczna plama z filmu krwi do rozmazów krwi obwodowej i próbek szpiku kostnego. Czerwone krwinki zabarwiają się na różowo, płytki krwi zabarwiają się na jasnoróżowo,cytoplazma limfocytów na niebiesko, cytoplazma monocytów na niebiesko, a chromatyna jądrowa na leukocytach na Czerwono.
  7. Giemsa stain służy również do wizualizacji chromosomów, identyfikacji anomalii chromosomowych, takich jak translokacja i rearanżacja,
  8. Giemsa plami histoplazmę grzyba, bakterie Chlamydia i może być używany do identyfikacji komórek tucznych.

zalety

  • łatwo dostępne, łatwe w przygotowaniu, konserwacji i użyciu

ograniczenia

  • robocza bejca Giemsa musi być przygotowana krótko przed użyciem.
  1. techniki barwienia: Giemsa Kathleen P Freeman, Karen L Gerber: Vetstream
  2. ; Hematologia praktyczne / technika barwienia Giemsa
  3. jak działają plamy Romanowsky 'ego i dlaczego pozostają cenne – w tym proponowany uniwersalny mechanizm barwienia Romanowsky’ ego i racjonalny schemat rozwiązywania problemów horobin rw./ncbi.NLM.nih.Gov

źródła internetowe

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK