Northern blot

Northern blot to metoda laboratoryjna stosowana do wykrywania specyficznych cząsteczek RNA wśród mieszanek RNA. Northern blotting może być użyty do analizy próbki RNA z tkanki lub typu komórki w celu zmierzenia ekspresji RNA genów cząsteczkowych. Metoda ta została nazwana ze względu na podobieństwo do techniki znanej jako Southern blot.

pierwszym krokiem w północnej plamce jest denaturacja lub oddzielenie RNA w próbce na pojedyncze nici, co zapewnia, że nici są rozłożone i że nie ma wiązania między nićmi. Cząsteczki RNA są następnie rozdzielane zgodnie z ich rozmiarami za pomocą metody zwanej elektroforezą żelową. Po separacji RNA jest przenoszony z żelu na błonę blotującą.(Chociaż ten krok jest tym, co nadaje technice nazwę „northern blotting”, termin ten jest zwykle używany do opisania całej procedury.) Po zakończeniu transferu, błona blotting przenosi wszystkie pasma RNA pierwotnie na żel. Następnie membrana jest traktowana małym kawałkiem DNA lub RNA nazywanym sondą, która została zaprojektowana tak, aby miała sekwencję komplementarną do sekwencji aparticular RNA w próbce; pozwala to sondzie hybrydyzować, orbitować, do określonego fragmentu RNA na membranie. Ponadto sonda ma alabel, który jest zazwyczaj atomem radioaktywnym lub barwnikiem fluorescencyjnym. Tak więc, po hybrydyzacji, sonda pozwala zainteresowanej cząsteczce RNA na wykrycie spośród wielu różnych cząsteczek RNA na membranie.