Technologia Hybridoma

zastosowanie przeciwciał monoklonalnych jest liczne i obejmuje zapobieganie, diagnozowanie i leczenie choroby. Na przykład, przeciwciała monoklonalne mogą odróżnić podgrupy limfocytów B i limfocytów T, co jest pomocne w identyfikacji różnych typów białaczek. Ponadto, specyficzne przeciwciała monoklonalne zostały wykorzystane do określenia markerów powierzchni komórek na białych krwinkach i innych typach komórek. Doprowadziło to do klastra serii różnicowania markerów. Są one często określane jako markery CD i definiują kilkaset różnych składników powierzchni komórek, każdy określony przez wiązanie konkretnego przeciwciała monoklonalnego. Takie przeciwciała są niezwykle przydatne do sortowania komórek aktywowanych fluorescencją, specyficznej izolacji poszczególnych typów komórek.

w histopatologii diagnostycznejedytuj

za pomocą przeciwciał monoklonalnych można klasyfikować tkanki i narządy na podstawie ich ekspresji określonych markerów, które odzwierciedlają genezę tkanki lub komórki. Antygen specyficzny dla gruczołu krokowego, łożyskowa fosfataza alkaliczna, ludzka gonadotropina kosmówkowa, α-fetoproteina i inne są antygenami związanymi z narządami, a produkcja przeciwciał monoklonalnych przeciwko tym antygenom pomaga w określeniu charakteru guza pierwotnego.

przeciwciała monoklonalne są szczególnie przydatne w rozróżnianiu morfologicznie podobnych zmian, takich jak międzybłoniak opłucnej i otrzewnej, gruczolakorak, oraz w określaniu pochodzenia narządu lub tkanki niezróżnicowanych przerzutów. Wybrane przeciwciała monoklonalne pomagają w wykrywaniu utajonych przerzutów (raka nieznanego pochodzenia pierwotnego) poprzez analizę immuno-cytologiczną szpiku kostnego, innych aspiratów tkankowych, a także węzłów chłonnych i innych tkanek i mogą mieć zwiększoną wrażliwość na normalne zabarwienie histopatologiczne.

w jednym badaniu przeprowadzono wrażliwy test immuno-histochemiczny na aspiracjach szpiku kostnego u 20 pacjentów z zlokalizowanym rakiem gruczołu krokowego. W teście zastosowano trzy przeciwciała monoklonalne (T16, C26 i Ae-1), zdolne do rozpoznawania antygenów błonowych i cytoszkieletowych wyrażanych przez komórki nabłonkowe w celu wykrycia komórek nowotworowych. Aspiracje szpiku kostnego u 22% chorych na raka gruczołu krokowego (Stadium B, 0/5; Stadium C, 2/4) i u 36% chorych na raka gruczołu krokowego z przerzutami (Stadium D1, 0/7; Stadium D2, 4/4) miały komórki antygenowo-dodatnie w szpiku kostnym. Stwierdzono, że immuno-histochemiczne zabarwienie aspiratów szpiku kostnego jest bardzo przydatne do wykrywania utajonych przerzutów do szpiku kostnego u pacjentów z pozornie zlokalizowanym rakiem prostaty.

chociaż immuno-cytochemia przy użyciu przeciwciał monoklonalnych związanych z guzem doprowadziła do poprawy zdolności do wykrywania utajonych komórek raka piersi w aspiracjach szpiku kostnego i krwi obwodowej, dalszy rozwój tej metody jest konieczny, zanim będzie można ją rutynowo stosować. Jedną z głównych wad immuno-cytochemii jest to, że stosuje się tylko przeciwciała monoklonalne związane z guzem, a nie specyficzne dla nowotworu, w wyniku czego może wystąpić reakcja krzyżowa z normalnymi komórkami.

aby skutecznie zaszczepić raka piersi i ocenić skuteczność schematów oczyszczania przed autologicznym wlewem komórek macierzystych, ważne jest wykrywanie nawet niewielkich ilości komórek raka piersi. Metody Immuno-histochemiczne są idealne do tego celu, ponieważ są proste, wrażliwe i dość specyficzne. Franklin i in. przeprowadzono wrażliwy test immuno-cytochemiczny, stosując kombinację czterech przeciwciał monoklonalnych (260f9, 520c9, 317g5 i BrE-3) przeciwko glikoproteinom powierzchniowym komórek nowotworowych w celu identyfikacji komórek nowotworowych piersi w szpiku kostnym i krwi obwodowej. Na podstawie wyników doszli do wniosku, że immuno-cytochemiczne barwienie szpiku kostnego i krwi obwodowej jest wrażliwym i prostym sposobem wykrywania i ilościowego określania komórek raka piersi.

jedną z głównych przyczyn nawrotu przerzutów u pacjentów z guzami litymi jest wczesne rozprzestrzenianie się komórek nowotworowych. Zastosowanie przeciwciał monoklonalnych (mAbs) specyficznych dla cytokeratyn może zidentyfikować rozsiane poszczególne komórki nowotworowe nabłonka w szpiku kostnym.

jedno z badań donosi o opracowaniu immuno-cytochemicznej procedury jednoczesnego znakowania składnika cytokeratyny nr 18 (CK18) i antygenu specyficznego dla prostaty (PSA). Pomogłoby to w dalszej charakteryzacji rozsianych pojedynczych komórek nowotworowych nabłonka u pacjentów z rakiem prostaty. Dwanaście aspiracji kontrolnych od pacjentów z łagodnym przerostem gruczołu krokowego wykazało negatywne zabarwienie, co dodatkowo potwierdza specyficzność CK18 w wykrywaniu komórek nowotworowych nabłonka w szpiku kostnym.

w większości przypadków choroby nowotworowej powikłanej wysiękiem łatwo rozpoznać komórki nowotworowe. Jednak w niektórych przypadkach komórki nowotworowe nie są tak łatwo widoczne lub ich obecność jest zbyt wątpliwa, aby nazwać to pozytywnym raportem. Zastosowanie technik immuno-cytochemicznych zwiększa dokładność diagnostyczną w tych przypadkach.

Ghosh, Mason i Spriggs przeanalizowali 53 próbki płynu opłucnowego lub otrzewnowego od 41 pacjentów z chorobą nowotworową. Konwencjonalne badanie cytologiczne nie wykazało żadnych komórek nowotworowych. Trzy przeciwciała monoklonalne (anty-cea, Ca 1 i Hmfg-2) zostały użyte do wyszukiwania komórek nowotworowych. Znakowanie immunocytochemiczne przeprowadzono na nieutwardzonych rozmazach, które przechowywano w temperaturze -20 ° C do 18 miesięcy. Dwanaście z czterdziestu jeden przypadków, w których przeprowadzono barwienie immuno-cytochemiczne, ujawniło komórki nowotworowe. Wynik ten stanowił wzrost dokładności diagnostycznej o około 20%. W badaniu stwierdzono, że u pacjentów z podejrzeniem choroby nowotworowej znakowanie immuno-cytochemiczne powinno być rutynowo stosowane w badaniu próbek cytologicznie ujemnych i ma istotne implikacje w odniesieniu do postępowania z pacjentem.

innym zastosowaniem barwienia immuno-cytochemicznego jest wykrywanie dwóch antygenów w tym samym rozmazie. Podwójne barwienie przeciwciałami o łańcuchu lekkim oraz markerami komórek T I B może wskazywać na nowotworowe pochodzenie chłoniaka.

w jednym z badań odnotowano izolację linii komórkowej hybrydomy (klon 1e10), która wytwarza przeciwciało monoklonalne (IgM, izotyp k). To przeciwciało monoklonalne wykazuje swoiste immuno-cytochemiczne zabarwienie nukleoli.

tkanki i nowotwory można sklasyfikować na podstawie ekspresji pewnych markerów, przy pomocy przeciwciał monoklonalnych. Pomagają one w odróżnianiu morfologicznie podobnych zmian oraz w określaniu pochodzenia narządu lub tkanki niezróżnicowanych przerzutów. Analiza Immuno-cytologiczna szpiku kostnego, aspiracji tkanek, węzłów chłonnych itp. z wybranymi przeciwciałami monoklonalnymi pomagają w wykrywaniu utajonych przerzutów. Przeciwciała monoklonalne zwiększają czułość w wykrywaniu nawet niewielkich ilości inwazyjnych lub przerzutowych komórek. Przeciwciała monoklonalne (MAB) specyficzne dla cytokeratyn mogą wykrywać rozsiane pojedyncze komórki nowotworowe nabłonka w szpiku kostnym.