4G/4G Genótipo do PAI-1 Gene Está Associado Com um Risco Reduzido de acidente vascular cerebral em Idosos

inibidor do ativador do Plasminogênio tipo 1 (PAI-1), que forma um complexo com tecido do tipo de ativador de plasminogênio (tPA), é um forte inibidor da fibrinólise.1 actividade elevada de PAI-1 tem sido associada a um risco aumentado de acontecimentos coronários em populações com angina de peito 2,3 e em doentes pós–enfarte do miocárdio (em).4,5 no entanto, o PAI-1 não é provavelmente um factor de risco independente para a doença cardíaca coronária em geral (saudável) populações.6-9

o polimorfismo 4G/5G é um polimorfismo comum na região promotora do gene PAI-1.10 ambos os alelos 4G e 5G têm um local de ligação para um activador de transcrição. O alelo 5G, no entanto, tem um local de ligação adicional para um compressor, resultando em taxas de transcrição mais baixas e menos atividade PAI-1.11-13 uma associação entre o polimorfismo 4G/5G e a doença cardiovascular (DCV) proporcionaria apoio para um papel causal do PAI-1, uma vez que é improvável que o nível geneticamente determinado seja influenciado pelo processo da doença (inflamatória) e pelos factores de risco cardiovascular. Uma meta-análise recente de 9 estudos demonstrou um aumento de 20% do risco de em para o genótipo 4G/4G.14

as associações de PAI-1 e o polimorfismo 4G/5G com AVC receberam pouca atenção em comparação com a relação com a doença coronária. No estudo do Norte da Suécia relativo à monitorização das tendências e determinantes das doenças cardiovasculares (MONICA), o risco de primeiro acidente vascular cerebral foi previsto pelo complexo TPA*PAI-1, mas não pela actividade PAI-1.Os dados epidemiológicos sugerem um efeito protector do alelo 4G contra os acontecimentos cerebrovasculares.16-21 no presente estudo baseado na população em 637 idosos neerlandeses, examinámos os efeitos separados e combinados da actividade PAI-1 e o polimorfismo 4G/5G na incidência de acontecimentos cardiovasculares.

Sujeitos e Métodos

População de Estudo

Arnhem Idosos do Estudo é de uma população baseada em estudo de coorte que se iniciou em 1991/1992. Convidámos uma amostra aleatória (estratificada para a idade e o sexo) de 1793 homens e mulheres com idades entre 65 e 84 anos, independentemente, na cidade de Arnhem, Países Baixos. Um total de 1012 indivíduos concordaram em ser entrevistados, e 685 concordaram em fazer um exame físico e venopunctura. A concepção do estudo e as características da população foram descritas em pormenor noutro local.22

foi obtida uma única amostra de sangue não tastante em 641 indivíduos. Faltavam dados tanto sobre a actividade PAI-1 Como sobre o polimorfismo 4G/5G para 4 indivíduos, deixando 637 indivíduos para a presente análise. A actividade do PAI-1 não pôde ser avaliada em 31 indivíduos e a determinação do genótipo não foi bem sucedida em 8 indivíduos. A população do presente estudo incluiu mais homens do que a população não participar ou só tinha uma entrevista (52% versus 44%; P=0,01) e foi significativamente mais jovem (de 73,6 versus 76.1 anos; P<0.001). Outras características, incluindo factores de estilo de vida e a auto-percepção da saúde, não diferiam significativamente entre estes grupos. Todas as matérias deram o seu consentimento por escrito e o estudo foi aprovado pelo Comité de Ética da Universidade de Wageningen.

coleta de dados

entrevistadores treinados coletaram dados sobre estilo de vida, saúde atual e passada, e medicação. O estado de fumar foi codificado como actual, anterior ou nunca. O índice de Massa Corporal (IMC) foi calculado em peso dividido pela altura ao quadrado (kg/m2). A DCV foi considerada presente se os indivíduos relataram história de doença cardíaca ou acidente vascular cerebral. Os indivíduos foram considerados medicados cardiovascular se tiverem utilizado inibidores da enzima de conversão da angiotensina, bloqueadores-β, agentes trombolíticos, agentes redutores dos lípidos e/ou salicilatos durante os 3 meses anteriores à entrevista. A hipertensão foi definida como pressão arterial ≥160/95 mm Hg ou uso de medicação anti-hipertensiva.

determinações laboratoriais

a Venipunctura foi realizada entre as 8 horas e as 5 horas.:30 pm com a utilização de tubos de recolha de citrato, e tempo de colheita de sangue foi registado. As amostras foram armazenadas a -80°C. A actividade plasmática do PAI-1 foi determinada com o Kit de Cromolização (Biopool). A variável para PAI-1 que foi usada neste estudo é a porção total do PAI-1 que permanece após a formação do complexo TPA * PAI-1. o antigénio tPA foi medido com o imulyse kit (Biopool). A genotipagem 4G/5G foi realizada de acordo com Margaglione et al,23 com ligeira modificação. Brevemente, um oligonucleótido mutado foi sintetizado, que inseriu um local para a enzima BseLI dentro do produto da amplificação. Os produtos da reacção de polimerase em cadeia foram digeridos a 55 ° C com a enzima BseLI (MBI fermentadas). O colesterol total sérico foi determinado enzimaticamente (CHOD-PAP) e os níveis de colesterol HDL e LDL foram medidos directamente (método HDL dimensional e LDL N-Geneous, respectivamente). A insulina sérica foi determinada com um doseamento imunométrico (insulina Immulite 2000). A proteína C-reactiva (PCR) foi avaliada através de um procedimento de doseamento imunoabsorvente enzimático altamente sensível.24

os registos municipais forneceram dados sobre mortalidade e migração até fevereiro de 2001. Uma pessoa foi perdida por causa da emigração. Os dados relativos à morbilidade e à mortalidade por causas específicas foram obtidos junto dos médicos de Clínica Geral através de um formulário normalizado. Nos Países Baixos, o médico de clínica geral constitui a ligação central a todos os cuidados médicos especializados, e é pouco provável que os acontecimentos clínicos não se percam com o nosso procedimento de acompanhamento. Trinta e nove indivíduos não autorizaram a recolha de dados de acompanhamento. Para uma série de indivíduos, o médico de clínica geral não pôde ser identificado (n=31), não cooperou (n=39) ou não forneceu dados adequados (n=10). O acompanhamento da morbilidade e da mortalidade específica por causa foi completo para 518 indivíduos (268 homens e 250 mulheres; 81% dos indivíduos com dados sobre o genótipo de PAI-1 e/ou 4G/5G). As características dos indivíduos que foram seguidos foram semelhantes às dos que não foram seguidos, excepto para um nível mais baixo de colesterol sérico (6, 0 versus 6, 3 mmol/l; P=0, 02).

os acontecimentos cardiovasculares e as causas de morte foram codificados por um médico (E. J. G.) com base nas informações obtidas pelo médico de Clínica Geral, de acordo com a Classificação Estatística Internacional das doenças, décima revisão (CID-10). Os pontos finais incluíram mortalidade por todas as causas, mortalidade cardiovascular (códigos ICD I00 a I96), incidência de em (I21 a I22, fatal e não fatal), incidência de acidente vascular cerebral (I60 a I69, fatal e não fatal) e incidência de acidente isquémico transitório (ait) (G45). Em caso de eventos recorrentes, apenas o primeiro evento foi considerado na análise.

análises estatísticas

diferenças nas características dos indivíduos entre os genótipos 4G / 5G foram testadas com ANOVA (variáveis contínuas) ou χ2 (variáveis categóricas). The presence of Hardy-Weinberg equilibrium for 4G / 5G polymorphism was examined by χ2 test. Os coeficientes de correlação de Spearman (rs) foram calculados para a associação de PAI-1 com outros fatores de risco cardiovascular. As razões da taxa de perigo (subsequentemente designadas como riscos relativos ) em tertis de PAI-1 e tPA foram obtidas pela análise de risco proporcional de Cox, sendo o tertil mais baixo utilizado como referência. As RRs foram ajustadas para a idade e sexo (Modelo 1) e adicionalmente para IMC, estado tabágico (actual, anterior, nunca), história de DCV, medicação cardiovascular, hipertensão, colesterol total, colesterol LDL e CRP sérico (modelo 2). As análises de PAI-1 e tPA foram adicionalmente ajustadas em função do tempo de colheita de sangue devido à variação circadiana. O sistema SAS foi utilizado para análises estatísticas. O nível de significância foi definido com um valor de probabilidade de 2 lados <0, 05.

Resultados

O risco de eventos cardiovasculares e mortalidade por todas as causas em tertiles de PAI-1 atividade (<0.9, 0.9 para 3,9, e >3.9 UI/mL) é mostrado na Tabela 2. Observou-se um risco aumentado de acidente vascular cerebral 3 vezes superior nos tertis médios e mais elevados do PAI-1, que se tornou mais forte (RR >5) após ajuste para os factores de risco cardiovascular (principalmente IMC e lípidos séricos). A exclusão de 129 indivíduos com história de DCV não alterou as relações (dados não apresentados). Ajuste adicional para a tPA atenuado, em parte, a associação de PAI-1 com a mortalidade cardiovascular (RR=2.0; 95% CI, 1.0 para 3,9 em meio tertile, e RR=2.5; IC 95%, 1,1-5,7 no mais alto tertile) e mortalidade geral (RR=1.1; 95% CI, de 0,8 a 1,6, e RR=1.4; 95% CI, de 0,9 2,1, respectivamente). A actividade do PAI – 1 foi positivamente associada à incidência de em e TIA, mas a tendência para os tertis não atingiu significado estatístico (Quadro 2).

a associação do genótipo 4G/5G com acontecimentos cardiovasculares e mortalidade por todas as causas é apresentada na Tabela 3. Após ajuste para a idade e o sexo, o risco de acidente vascular cerebral, TIA e mortalidade cardiovascular foi reduzido em >50% em indivíduos com o genótipo 4G/4G. O ajustamento dos factores de risco cardiovascular (modelo 2) não alterou substancialmente estas associações. A restrição da análise ao acidente vascular cerebral isquémico originou uma redução mais acentuada do risco para o genótipo 4G/4G (RR=0, 2; IC 95%, 0, 04 a 1, 0). O polimorfismo 4G / 5G não previu significativamente o em incidente e a mortalidade por todas as causas (Tabela 3).

a Figura 1 mostra uma visão geral dos estudos epidemiológicos sobre polimorfismo e acidente vascular cerebral 4G/5G. A figura 2 apresenta risco de acidente vascular cerebral em categorias de genótipo de PAI-1, 4G/5G plasmático, e estes factores combinados. Previsto de 10 anos do curso livre de sobrevivência foi fortemente reduzido para 72.2% em 5G operadoras com níveis elevados de PAI-1 (≥0.9 UI/mL) em comparação com a de 97,6% para 4G homozygotes com baixa PAI-1 (<0.9 UI/mL). Cox a análise proporcional do perigo ajustada para a idade, sexo e tempo de colheita de amostras de sangue mostrou resultados semelhantes.

discussão

numa população geral de idosos neerlandeses, encontramos um risco fortemente reduzido de acidente vascular cerebral, TIA e mortalidade cardiovascular para o genótipo 4G/4G do gene PAI-1. Em contraste com esta observação, a actividade plasmática elevada de PAI-1 foi associada a um risco aumentado de acontecimentos cerebrovasculares. O risco de acidente vascular cerebral foi notavelmente elevado em portadores de 5G com elevado PAI-1 plasmático.

a nossa população do estudo não estava em equilíbrio de Hardy-Weinberg para o polimorfismo de 4G/5G (4G/4G, 31%; 4G/5G, 46%; e 5G/5g, 24%). O genótipo 5G / 5G parece estar sobre-representado na nossa população em comparação com outro estudo holandês em >12 000 mulheres (distribuição de 31%, 51% e 18%, respectivamente).20 o desequilíbrio em nosso estudo pode resultar da seleção relacionada ao genótipo, possivelmente devido à exclusão de idosos institucionalizados ou sobrevivência diferencial. No entanto, a distribuição do genótipo 4G/5G no nosso estudo não foi muito diferente da de outras populações brancas. No estudo da aterosclerose de resistência à insulina,25 a distribuição em brancos foi de 29% para 4G/4G, 47% para 4G/5G, e 25% para 5G/5g, que foi relatado estar em equilíbrio Hardy-Weinberg. Em 205 indivíduos com idade > 80 anos, as distribuições correspondentes foram de 30%, 47% e 23%.26 devido à natureza prospectiva das nossas análises, não pensamos que a ausência de um equilíbrio Hardy-Weinberg para o polimorfismo 4G/5G tenha resultado numa grande distorção das nossas descobertas.

reportamos um efeito protector do alelo 4G contra o AVC, que está de acordo com estudos epidemiológicos anteriores.16-21 um estudo coreano rendeu dados contrastantes, possivelmente como resultado de diferenças raciais.No que diz respeito a outros resultados, observámos uma modesta elevação do risco de enfarte do miocárdio em indivíduos com 4G/4G. Essa constatação, embora não estatisticamente significativos, o que está de acordo com a meta-análise Boekholdt et al., 14 que relatou uma taxa de odds ratio de 1,2 (IC 95%, 1.0 a 1.4). Encontramos um risco fortemente reduzido de mortalidade cardiovascular para 4G/4G, provavelmente como resultado de doenças cerebrovasculares que constituíram 43% dos casos fatais.

o PAI-1 plasmático não pareceu ser um factor de risco muito forte para o em no nosso estudo (RR ≈1, 5). O ajuste para a CRP de marcador inflamatório ou a exclusão de casos prevalentes de DCV não afetou esta relação. Os nossos dados estão de acordo com o estudo de saúde Cardiovascular entre indivíduos idosos,6 nos quais o PAI-1 não foi um forte preditor de eventos coronários. Uma relação entre PAI-1 e em incidente foi encontrada principalmente em doentes com perturbações coronárias,2-5 o que pode explicar a associação relativamente fraca numa população geral de idosos. Estamos entre os primeiros a demonstrar que o PAI-1 plasmático elevado (principalmente independente de 4G/5G) é um forte indicador de risco de acidente vascular cerebral na velhice. O mecanismo subjacente da elevação de PAI-1 pode ser de origem genética, mas a regulação genética do PAI-1 plasmático é em grande parte desconhecida. Alternativamente, a elevação de PAI-1 pode ser causada por um mecanismo subjacente de resistência à insulina e inflamação sistémica, como parte do processo CVD.1

os nossos dados sugerem que a associação genótipo-fenótipo para o polimorfismo de 4G/5G e PAI-1 é fraca. A regulação diferencial ou função do PAI-1 no plasma e nos tecidos pode explicar os resultados contrastantes para o polimorfismo 4G/5G e a actividade PAI-1 que encontrámos em relação ao AVC. Em animais, foi demonstrada a produção celular local de PAI-1 e tPA e um papel definido deste sistema de protease nos tecidos.28,29 processos inflamatórios localizados desempenham um papel importante no processo de aterosclerose e ruptura da placa. Com base nos nossos dados, sugerimos que existem mecanismos locais no tecido cerebral que explicam o efeito protector de 4G/5G contra o AVC. Nós hipotetizamos que em locais inflamatórios, o aumento putativo de PAI-1 é mais forte para o alelo 4G e que isto inibe a proteólise. Isto pode, por exemplo, resultar na estabilização da placa e no aumento da neutralização do tPA, que é potencialmente neurotóxico.30

em conclusão, os nossos dados sugerem um papel protector para o alelo 4G no desenvolvimento do acidente vascular cerebral na velhice, enquanto que a actividade do PAI-1 no plasma parece ser prejudicial. Esta relação aparentemente paradoxal precisa ser confirmada em grandes estudos baseados na população que focam tanto na atividade PAI-1 quanto no polimorfismo 4G/5G.

notas