coloração de TUNEL e ensaio de TUNEL
Gao Y et al. utilizou o kit de ensaio AB206386 da HRP-DAB TUNEL para analisar as secções tecidulares dos ovários do Ratinho. A. seção tratada com DNase I como controle positivo. B. Controlo Negativo sem enzima TdT. imagens experimentais representativas. Os núcleos manchados com o ensaio de TUNEL são castanhos. As secções foram contrastadas com verde-metilo.
Vantagens e desvantagens dos métodos de coloração TUNEL
TUNEL de coloração / TUNEL protocolos de ensaio que usar um nucleotídeo diretamente marcados com um corante fluorescente são mais rápidos do que os métodos indirectos, que o uso de um anticorpo ou um estreptavidina-biotina complexo, pois requer menos etapas de coloração.Métodos que dependem de nucleótidos marcados com biotina podem beneficiar da amplificação do complexo estreptavidina-biotina. Eles exigem passos adicionais de bloqueio para neutralizar a biotina endógena e reduzir a coloração de fundo, embora estes sejam comuns a todos os pesquisadores que executam imunohistoquímica cromogénica tradicional.Métodos baseados em BrdU também podem produzir um sinal mais brilhante, já que o BrdU é normalmente mais facilmente incorporado pela enzima TdT.
the relative popularity of TUNEL staining/TUNEL assay methods
a survey of 50 research papers published in 2017 containing the term “TUNEL Assay” or “TUNEL Staining”, revealed that:
– 50% de papéis usados dUTP diretamente conjugado a FITC
– 15% no uso de biotina-dUTP e estreptavidina-HRP
– 15% usado FITC-dUTP e um anti-FITC anticorpo conjugado com HRP
– 12% utilizados digoxygenin-dUTP, e um anti-digoxygenin anticorpo conjugado a um corante fluorescente ou HRP
– 8% usado Br-dUTP e um anti-BrdU anticorpo conjugado com um corante fluorescente
Todos os artigos pesquisados utilizado o ensaio de TUNEL em imagens em vez de citometria de fluxo. Onde HRP foi usado, substrato de DAB foi adicionado para criar uma mancha castanha. Mais de 90% dos trabalhos de pesquisa usaram um kit para coloração de TUNEL.