Giemsa Mancha – Princípio, Procedimento, Resultados, Interpretação

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Atualizada por Último sobre 5 de fevereiro de 2020 por Sagar Aryal

Introdução

Giemsa mancha foi um nome adotado a partir de uma Alemanha Químico cientista, para a sua aplicação de uma combinação de reagentes em demonstrar a presença de parasitas da malária.

pertence a um grupo de manchas conhecidas como manchas de Romanowsky. Estas são manchas neutras feitas de uma mistura de azul de metileno oxidado, azure, e eosina Y e elas são realizadas em uma lâmina seca ao ar que é pós-fixada com metanol. As manchas de Romanowsky são aplicadas na diferenciação das células, exames patológicos de amostras como sangue e medula óssea e demonstração de parasitas, por exemplo, malária. Há quatro tipos de manchas Romanoswsky:

  • Giemsa mancha
  • Jenner Mancha
  • Wright mancha
  • May-Grunwald Mancha
  • Leishman mancha

Objectivos de Giemsa mancha

  • Com precisão preparar o Giemsa mancha solução estoque
  • colorir e identificar células do sangue
  • Para diferenciar células do sangue núcleos do citoplasma

Princípio

Giemsa mancha é um padrão-ouro de coloração técnica que é usada para ambos finas e espessas manchas para examinar o sangue para os parasitas da malária, um check-up de rotina para outros parasitas do sangue e para diferenciar morfologicamente o nuclear e citoplasma dos eritrócitos, leucócitos e plaquetas e parasitas.Como qualquer tipo de manchas de Romanowsky, compõe-se tanto de corantes ácidos como básicos, em relação às afinidades de acidez e basicidade para as células sanguíneas. Azure e azul de metileno, um Corante Básico liga-se ao núcleo ácido produzindo cor azul-púrpura. A eosina é um corante ácido que é atraído pelo citoplasma e grânulos citoplásmicos que são coloração vermelha alcalina. A mancha deve ser tamponada com água para pH 6.8 ou 7.2, para precipitar os corantes para ligar materiais simples.

classicamente, a coloração de Giemsa é uma coloração diferencial que é feita de uma combinação de reagentes (Azure, azul de metileno e corante de eosina) amplamente utilizados na citogenética e histopatologia para o diagnóstico de:

  1. Malária, espiroquetas e outros parasitas do sangue
  2. Chlamydia trachomatis inclusão órgãos
  3. Borrelia spp
  4. Yersinia pestis
  5. Histoplasma spp
  6. Pneumocystis jiroveci cistos

Reagentes Utilizados

  • O metanol
  • Giemsa em pó
  • Glicerina
  • Água (Buffer)

Procedimento

Preparação do Giemsa Mancha solução Estoque (500ml)

  1. Em 250 ml de metanol, adicione a 3,8 g de Giemsa em pó e dissolva.
  2. aquecer a solução até ~60oC
  3. depois, adicionar 250 ml de glicerina à solução, lentamente.
  4. filtrar a solução e deixá-la em repouso durante cerca de 1-2 meses antes da utilização.

Preparação da solução de Trabalho

  1. Adicionar 10ml da solução estoque para 80 ml de água destilada e 10 ml de metanol

procedimento de Coloração 1: Filme Fino de coloração

  1. Em um seco e limpo microscópica lâmina de vidro, faça uma fina película de amostra (sangue) e deixar secar ao ar.
  2. mergulhar o esfregaço (2-3 dips) em metanol puro para fixação do esfregaço, deixar secar ao ar durante 30 segundos
  3. inundar a lâmina com solução de coloração de Giemsa a 5% durante 20-30 minutos.
  4. Lave com água corrente e deixar secar

NOTA: Em caso de emergência, deixe o Giemsa mancha solução por 5-10 minutos

Procedimento de Coloração, 2: Filme Espesso de Coloração

  1. Adicionar uma densa mancha de sangue e de ar seco por 1 hora em uma coloração rack.
  2. mergulhe a espessa mancha de sangue na mancha de Giemsa diluída (preparada tomando 1 ml da solução-mãe e adicionando 49 ml de tampão fosfato ou água destilada, mas os resultados podem variar de forma diferente).
  3. Lave a mancha por imersão em água tamponada de água destilada por 3 a 5 minutos
  4. Deixe secar

Resultados

Citoplasma e grânulos citoplasmáticos de células do sangue aparecem na cor vermelha, enquanto o núcleo aparece azul, na cor roxa.

os eritrócitos aparecerão rosa em coloração

  • eosinófilos terão um núcleo Roxo Azul, um citoplasma rosa pálido e grânulos vermelho alaranjado.
  • os neutrófilos aparecerão com núcleo roxo-vermelho e um citoplasma rosa.
  • os basófilos terão um núcleo roxo e grânulos azulados.
  • os linfócitos têm um núcleo azul escuro e um citoplasma azul claro.Os monócitos têm um núcleo roxo e um citoplasma rosa.As plaquetas terão grânulos roxos.

Giemsa Stain-Principle, Procedure, Results, Interpretation

Image Source: Wikipedia

Interpretation

Azure and methylene blue, a basic dye binds to the acid nucleus producing blue-purple color. A eosina é um corante ácido que é atraído pelo citoplasma e grânulos citoplásmicos que são coloração alaranjada alcalina.

Applications Giemsa stain

  1. Giemsa stain is specific for the phosphate groups of DNA. Liga-se a regiões de ADN com elevadas quantidades de ligação adenina-timina.
  2. a coloração de Giemsa é usada em bandas de Giemsa (g-banding), para manchar cromossomas e é frequentemente usada para criar uma representação diagramática de cromossomas (idiograma).Sendo uma mancha diferencial, a mancha de Giemsa pode ser usada para estudar a adesão de bactérias patogénicas às células humanas, diferenciando as células humanas como roxas e bacterianas como cor-de-rosa.
  3. pode ser usado para o diagnóstico histopatológico de malária e alguns espiroquetas e protozoários parasitas sanguíneos.
  4. também é usado na mancha de tecido de Wolbach I.a coloração do tecido hematopoiético e para a identificação de bactérias e rickettsia
  5. Giemsa é uma mancha de sangue clássica para esfregaços de sangue periférico e amostras de medula óssea. Os glóbulos vermelhos mancham rosa, as plaquetas mancham um rosa claro, o citoplasma linfocitário mancha azul-celeste, o citoplasma monocítico mancha azul pálido e a cromatina nuclear leucocitária mancha magenta.A mancha de Giemsa também é usada para visualizar cromossomas, identificando anomalias cromossômicas como translocação e rearranjo,
  6. Giemsa mancha o Histoplasma fungo, a bactéria Chlamydia, e pode ser usada para identificar as células de mastócitos.

> Vantagens

  • Prontamente disponível, fácil de preparar, manter e usar

Limitações

  • Trabalho Giemsa mancha deve ser preparados pouco antes de usar.
  1. técnicas de coloração: Giemsa por Kathleen P Freeman, Karen l Gerber: Vetstream
  2. mundo paramédico; Hematologia Práticas/a coloração de Giemsa Técnica
  3. Como Romanowsky manchas de trabalho e por isso que eles permanecem valiosas, incluindo uma proposta universal de coloração de Romanowsky mecanismo racional de solução de problemas esquema de Horobin RW./ncbi.nlm.nih.gov

Fontes da Internet

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK