Hybridoma technology
the use of monoclonal antibodies is numerous and includes the prevention, diagnostic, and treatment of disease. Por exemplo, os anticorpos monoclonais podem distinguir subconjuntos de células B e células T, o que é útil na identificação de diferentes tipos de leucemias. Adicionalmente, foram utilizados anticorpos monoclonais específicos para definir marcadores da superfície celular nos glóbulos brancos e outros tipos de células. Isto levou ao conjunto de séries de marcadores diferenciados. Estes são frequentemente referidos como marcadores CD e definem várias centenas de diferentes componentes da superfície celular das células, cada um especificado pela ligação de um anticorpo monoclonal particular. Estes anticorpos são extremamente úteis para a triagem celular activada por fluorescência, o isolamento específico de determinados tipos de células.
em histopatologiedit de diagnóstico
com a ajuda de anticorpos monoclonais, tecidos e órgãos podem ser classificados com base na sua expressão de certos marcadores definidos, que reflectem a génese tecidular ou celular. Antigénio específico da próstata, fosfatase alcalina placentária, gonadotrofina coriónica humana, α-fetoproteína e outros são antigénios associados a órgãos e a produção de anticorpos monoclonais contra estes antigénios ajuda a determinar a natureza de um tumor primário.
os anticorpos monoclonais são especialmente úteis para distinguir lesões morfologicamente semelhantes, como mesotelioma pleural e peritoneal, adenocarcinoma, e na determinação da origem do órgão ou tecido de metástases indiferenciadas. Anticorpos monoclonais seleccionados ajudam na detecção de metástases ocultas (cancro de origem primária desconhecida) por análise imuno-citológica da medula óssea, de outros aspirados de tecidos, bem como dos gânglios linfáticos e de outros tecidos e podem ter uma sensibilidade aumentada em relação à coloração histopatológica normal.
um estudo realizou um doseamento imuno-histoquímico sensível em aspirados de medula óssea de 20 doentes com cancro da próstata localizado. Foram utilizados no ensaio três anticorpos monoclonais (T16, C26 e AE-1), capazes de reconhecer antigénios de membrana e citoesqueleto expressos por células epiteliais para detectar células tumorais. A medula óssea aspira a 22% dos doentes com cancro da próstata localizado (Estadio B, 0/5; Estadio C, 2/4) e 36% dos doentes com cancro da próstata metastático (Estadio D1, 0/7; Estadio D2, 4/4 dos doentes) tinham células antigénicas positivas na medula óssea. Concluiu-se que a coloração imuno-histoquímica dos aspirados da medula óssea é muito útil para detectar metástases ocultas da medula óssea em doentes com cancro da próstata aparentemente localizado.
embora a imuno-citoquímica usando anticorpos monoclonais associados ao tumor tenha levado a uma melhor capacidade de detectar células ocultas do cancro da mama em aspirados da medula óssea e no sangue periférico, é necessário um maior desenvolvimento deste método antes de poder ser utilizado rotineiramente. Uma grande desvantagem da imuno-citoquímica é que apenas anticorpos monoclonais associados ao tumor e não específicos ao tumor são usados, e como resultado, alguma reação cruzada com as células normais pode ocorrer.
a fim de, de forma eficaz, encenar o cancro da mama e avaliar a eficácia dos regimes de purga antes da perfusão autóloga de células estaminais, é importante detectar mesmo pequenas quantidades de células cancerígenas da mama. Os métodos imuno-histoquímicos são ideais para este fim porque são simples, sensíveis e bastante específicos. Franklin et al. realizou um ensaio imuno-citoquímico sensível utilizando uma combinação de quatro anticorpos monoclonais (260F9, 520C9, 317G5 e BrE-3) contra as glicoproteínas da superfície das células tumorais para identificar as células tumorais da mama na medula óssea e no sangue periférico. Concluiu-se, a partir dos resultados, que a coloração imuno-citoquímica da medula óssea e do sangue periférico é uma forma sensível e simples de detectar e quantificar as células cancerígenas da mama.
uma das principais razões para a recidiva metastática em doentes com tumores sólidos é a disseminação precoce de células malignas. A utilização de anticorpos monoclonais (mAbs) específicos para as citoqueratinas pode identificar células tumorais epiteliais individuais disseminadas na medula óssea.
um estudo relata o desenvolvimento de um procedimento imuno-citoquímico para a rotulagem simultânea do componente de citoqueratina n. º 18 (CK18) e do antigénio específico da próstata (PSA). Isso ajudaria na caracterização adicional de células tumorais epiteliais disseminadas individuais em pacientes com câncer de próstata. Os doze aspirados de controlo de doentes com hipertrofia prostática benigna mostraram coloração negativa, o que suporta ainda mais a especificidade de CK18 na detecção de células tumorais epiteliais na medula óssea.
na maioria dos casos de doença maligna complicada por efusão, as células neoplásicas podem ser facilmente reconhecidas. No entanto, em alguns casos, células malignas não são tão facilmente vistas ou sua presença é muito duvidosa para chamá-lo de um relatório positivo. Nestes casos, a utilização de técnicas imuno-citoquímicas aumenta a precisão do diagnóstico.
Ghosh, Mason e Spriggs analisaram 53 amostras de fluido pleural ou peritoneal de 41 doentes com doença maligna. O exame citológico convencional não revelou quaisquer células neoplásicas. Foram utilizados três anticorpos monoclonais (anti-CEA, Ca 1 e HMFG-2) para procurar células malignas. A rotulagem imunocitoquímica foi realizada em esfregaços não manchados, que foram armazenados a -20 °C até 18 meses. Doze dos quarenta e um casos em que se procedeu à coloração imuno-citoquímica revelaram células malignas. O resultado representou um aumento na precisão de diagnóstico de aproximadamente 20%. O estudo concluiu que, em doentes com suspeita de doença maligna, a rotulagem imuno-citoquímica deve ser utilizada rotineiramente no exame de amostras citologicamente negativas e tem implicações importantes no que respeita à gestão do doente.
outra aplicação de coloração imuno-citoquímica consiste na detecção de dois antigénios no mesmo esfregaço. A coloração dupla com anticorpos de cadeia leve e marcadores de células T e B pode indicar a origem neoplásica de um linfoma.
um estudo relatou o isolamento de uma linha celular de hibridoma (clone 1E10), que produz um anticorpo monoclonal (IgM, K isótipo). Este anticorpo monoclonal apresenta uma coloração imuno-citoquímica específica dos nucleóis.
os tecidos e tumores podem ser classificados com base na sua expressão de certos marcadores, com a ajuda de anticorpos monoclonais. Ajudam a distinguir lesões morfologicamente semelhantes e a determinar a origem do órgão ou do tecido das metástases indiferenciadas. Análise imuno-citológica da medula óssea, aspiração de tecidos, gânglios linfáticos, etc. com anticorpos monoclonais selecionados ajudam na detecção de metástases ocultas. Os anticorpos monoclonais aumentam a sensibilidade na detecção de pequenas quantidades de células invasivas ou metastáticas. Os anticorpos monoclonais (mAbs) específicos das citoqueratinas podem detectar células tumorais epiteliais individuais disseminadas na medula óssea.