Northern blot

a northernblot is a laboratory method used to detect specific RNA molecules amixture of RNA. Northern blotting can be used to analyze a sample of RNA from aparticular tissue or cell type in order to measure the RNA expression ofparticular genes. Este método foi nomeado por sua similaridade com o techniqueknown como um blot sulista.

a primeira etapa de uma mancha do Norte é a desnaturação, ou separação, do ARN dentro da amostra em fios simples, o que garante que os fios são desdobrados e que não há ligação entre fios. As moléculas de RNA são então separadas de acordo com o seu tamanho usando um método chamado electroforese gel. Após a separação, o RNA é transferido do gel para uma membrana de coagulação.(Embora este passo é o que dá à técnica o nome de “Northern blotting”, o termo é tipicamente usado para descrever todo o procedimento.) Uma vez que a transferência está completa, a membrana de blotting carrega todas as bandas de RNA originalmente no gel. Ao lado, a membrana é tratada com um pequeno pedaço de DNA ou RNA calleda sonda, que foi projetado para ter uma sequência, complementar especialmente ajudando a sequência de ARN na amostra; isto permite que a sonda de hibridizar, orbind, a um fragmento de RNA específico na membrana. Além disso, a sonda tem alabel, que é tipicamente um átomo radioativo ou um corante fluorescente. Assim, após a hibridação, a sonda permite a molécula de RNA de interesse para bedetectada entre as muitas moléculas de RNA diferentes na membrana.