objectivo

para aprender a técnica de aglutinação em látex.É observada aglutinação do látex

quando uma amostra contendo o antigénio específico (ou anticorpo) é misturada com um anticorpo (ou antigénio) que é revestido na superfície de partículas de látex.

testes de aglutinação em Látex foram aplicados em laboratórios clínicos para a detecção de doenças infecciosas e, em 1956, a Cantora e Plotz descrita pela primeira vez Fator Reumatóide Teste, um teste baseado na aglutinação em látex. Na artrite reumatóide( ar), os anticorpos IgG produzidos por linfócitos na articulação sinovial reagem com os anticorpos IgM (RF, factor reumatóide) para gerar complexos imunológicos que activam o complemento e causam a destruição do tecido. O ar é de importância diagnóstica.

desde então, testes para detectar infecções microbianas e virais, Doenças auto-imunes, hormônios, medicamentos e proteínas séricas foram desenvolvidos e comercializados por muitas empresas em todo o mundo. O princípio é usado para o diagnóstico de muitas infecções, tais como hepatite B, H. influenzae, N. meningitidis, etc.. Todos os métodos de detecção ou de quantificação do antigénio ou do anticorpo aproveitam o facto de reagirem para formar um complexo. Na concentração óptima de antigénio-anticorpo, este complexo precipita-se. Contudo, se o antigénio for de natureza particulada, observa-se aglutinação do complexo antigénio-anticorpo.

reacções de aglutinação

a reacção entre um antigénio de partículas e um anticorpo resulta em aglomerações visíveis chamadas aglutinação. Os anticorpos que produzem estas reacções são conhecidos como aglutininas. O princípio das reacções de aglutinação é semelhante às reacções de precipitação; elas dependem da ligação cruzada de antigénios polivalentes. Quando o antigénio é um eritrocito, chama-se hemaglutinação.Teoricamente, todos os anticorpos podem aglutinar antigénios de partículas, mas a IgM, devido à sua elevada especificidade, é uma aglutinina particularmente boa.

não se pode observar aglutinação quando a concentração de anticorpos é elevada (diluições inferiores), e depois a amostra é diluída, ocorre aglutinação. O efeito da prozona é definido como a invisibilidade da aglutinação em concentrações elevadas de anticorpos. É devido à razão de que o excesso de anticorpo forma complexos muito minutos que não se amontoam para formar aglutinação visível.

teste qualitativo de aglutinação

testes de aglutinação podem ser utilizados de forma qualitativa para o doseamento da presença de um antigénio ou de um anticorpo. O anticorpo é misturado com o antigénio de partículas e um teste positivo é indicado pela aglutinação do antigénio de partículas.

por exemplo, para determinar o tipo sanguíneo do paciente, os glóbulos vermelhos da pessoa podem ser misturados com anticorpos para um antigénio do grupo sanguíneo. Outro exemplo é que, para determinar a presença de anticorpos numa amostra de doente, o soro do doente é misturado com os glóbulos vermelhos de um tipo sanguíneo conhecido.

teste quantitativo de aglutinação

para medir o nível de anticorpos aos antigénios de partículas, pode ser amplamente utilizado o teste de aglutinação. Para este teste, podem ser feitas diluições em série da amostra e é testada para anticorpos. Em seguida, uma quantidade fixa de antigénio de partículas ou bactérias ou glóbulos vermelhos pode ser adicionada a ele. Determinar a diluição máxima que forma aglutinação e esta diluição máxima que dá aglutinação observável é conhecida como título. Os resultados são apresentados como sendo o recíproco da diluição máxima que forma aglutinação visível.

hemaglutinação passiva

a sensibilidade e simplicidade das reacções de aglutinação podem ser alargadas a antigénios solúveis pela técnica de aglutinação passiva do heme. Nesta técnica, os glóbulos vermelhos revestidos por antigénios são preparados misturando um antigénio solúvel com um glóbulos vermelhos que foram tratados com ácido tânico ou cloreto de crómio, ambos os quais promovem a adsorção do antigénio à superfície das células. No entanto, é possível revestir os eritrócitos com um antigénio solúvel (ex.. antigénio viral, polissacárido ou hapten) e utilizar os glóbulos vermelhos revestidos num teste de aglutinação para pesquisa de anticorpos do antigénio solúvel.

soro diluído serialmente, que contém anticorpos, é carregado em cada alvéolo da placa de microtítulo, após a aplicação de glóbulos vermelhos revestidos por antigénio a cada alvéolo. O padrão característico dos glóbulos vermelhos aglutinados nos poços é usado como uma ferramenta para avaliar as reações de aglutinação. Se o antigénio for partículas, então o antigénio pode reagir com o anticorpo no soro e resulta na aglomeração do antigénio, o que mostra um resultado positivo.

nos últimos anos, houve uma mudança de células vermelhas do sangue para partículas sintéticas, tais como contas de látex. A preparação pode ser utilizada imediatamente ou armazenada para utilização posterior. O uso de contas sintéticas oferece as vantagens de consistência, uniformidade e estabilidade. Além disso, as reacções de aglutinação com esferas sintéticas podem ser lidas Rapidamente, frequentemente 3 a 5 minutos após a mistura das esferas com a amostra de ensaio. Quer com base nos glóbulos vermelhos ou nas esferas sintéticas mais convenientes e versáteis, as reacções de aglutinação são simples de executar, não requerem equipamento dispendioso e detectam uma pequena quantidade de anticorpos ( concentrações tão baixas como os nanogramas por mililitro).

o passo inicial no teste é a ligação da partícula de látex pelas moléculas de anticorpos que se ligam especificamente aos determinantes antigénicos na superfície das partículas. Há uma formação de grandes reticulados através destas ligações cruzadas e estes grandes reticulados sedimentos prontamente devido ao grande tamanho de aglomerados e são visíveis para o olho sem ajuda dentro de minutos. O grau de aglutinação pode ser determinado por plotar a concentração do aglutinante que dá uma curva em forma de sino. Os complexos antigénio-anticorpo podem ser ampliados utilizando as partículas de látex. Muitos dos testes de aglutinação de látex são realizados manualmente e detectados pela observação visual. Para determinar a aglutinação, deve conter cerca de 100 grumos, e estes grumos devem ter cerca de 50 micrómetros de tamanho para serem vistos pelos olhos.

reacções de inibição da aglutinação

se o anticorpo for incubado com antigénio antes de misturar com látex, a aglutinação é inibida; isto porque não existem anticorpos livres para aglutinação. Na inibição da aglutinação, a ausência de aglutinação é o diagnóstico do antigénio, proporciona um ensaio altamente sensível para pequenas quantidades de antigénio. Por exemplo, os kits de gravidez em casa contêm partículas de látex revestidas de gonadotropina coriónica humana (hormona HCG) e anticorpos à HCG. A urina de uma mulher grávida contém HCG, que é secretada pela placenta em desenvolvimento após a fertilização. A adição de urina contendo HCG inibe a aglutinação de partículas do látex quando se adiciona o anticorpo anti-HCG, pelo que a gravidez é indicada pela ausência de aglutinação.

as partículas de látex

polimerização de emulsão é o procedimento que é aplicado para a preparação de partículas de látex. Em primeiro lugar, o estireno é misturado com a solução surfactante (sulfato de sódio dodecilo), forma bilhões de micelas emulsionadas que estão em diâmetro uniforme. Em seguida, uma pequena quantidade de persulfato de potássio é adicionado a ele que é um iniciador de polimerização solúvel em água. Quando o processo de polimerização é concluído, as cadeias de poliestireno são dispostas nas micelas. A parte hidrocarbonada da cadeia de poliestireno é ligada ao centro e o íon sulfato terminal à superfície das esferas que é exposta à fase de água. Outros hidrocarbonetos e seus derivados também são usados para a produção de partículas de látex uniformes, alguns dos exemplos são estrireno-dlvinilbenzeno, Polimetacrilato de metilo, estireno vinil tolueno, polivinil tolueno etc.

o processo de produção de partículas de látex é desenvolvido a partir da produção de borracha sintética e também a emulsão tem um aspecto leitoso, o termo látex é dado a ele .O diâmetro desejado da partícula de látex pode ser feito modificando o processo de preparação, hidrocarbonetos, os tensioactivos e o iniciador. O tamanho das partículas de latexes são geralmente varia entre 0,05 µm a 2µm. Devido à presença de íons sulfato e sulfonato na superfície da partícula que fornece uma carga de superfície negativa inerente à partícula.

as partículas de látex podem ser funcionalizadas e tratadas à superfície para facilitar a estabilidade de ligação e aumentar a ligação do analito. Tratamentos funcionais tais como amidação, aminação, carboxilação, hidroxilação e até mesmo magnetização são usados para aumentar as propriedades das partículas de látex. Também várias cores de partículas de látex estão disponíveis comercialmente que facilitam a leitura visual.

o teste de aglutinação do látex é um método clínico para detectar certos antigénios ou anticorpos numa variedade de fluidos corporais, tais como sangue, saliva, urina ou líquido cefalorraquidiano. A amostra a testar é enviada para o laboratório e misturada com esferas de látex revestidas com um antigénio ou anticorpo específico. A aglomeração de esferas de látex (aglutinação) indica a presença de partículas suspeitas.

o teste de aglutinação em látex inclui algumas das vantagens .São,

1. Capacidade de obter resultados semi-quantitativos.
2. Um baixo custo individual de teste.
3. Tempo relativamente curto para obter resultados.

executando diluições 2 a 10 vezes de espécimes podemos obter os resultados semiquantitativos .Teste de aglutinação de látex tem algumas desvantagens também que incluem

1.Necessidade de interpretar cuidadosamente os resultados marginais e
2. Problemas de especificidade devido a substâncias interferentes em muitos ensaios.