colorarea tunelului și testul tunelului
Gao Y și colab. folosit HRP-DAB TUNEL assay kit ab206386 pentru a analiza secțiunile de țesut din ovarele mouse-ului. a. Secțiunea tratată cu DNase I ca martor pozitiv. B. control negativ fără enzimă TdT. C și f. imagini experimentale reprezentative. Nucleele colorate cu testul tunelului sunt maro. Secțiunile au fost contracarate cu verde metil.
avantajele și dezavantajele metodelor de colorare a tunelului
protocoalele de colorare / testare a tunelului care utilizează o nucleotidă direct etichetată cu un colorant fluorescent sunt mai rapide decât metodele indirecte, care utilizează fie un anticorp, fie un complex streptavidină-biotină, deoarece necesită mai puține etape de colorare.
metodele care se bazează pe nucleotide marcate cu biotină pot beneficia de amplificarea complexului streptavidină-biotină. Acestea necesită pași suplimentari de blocare pentru a neutraliza biotina endogenă și pentru a reduce colorarea de fond, deși acestea sunt comune tuturor cercetătorilor care rulează imunohistochimie cromogenă tradițională.
metodele bazate pe BrdU pot produce, de asemenea, un semnal mai luminos, deoarece BrdU este de obicei mai ușor încorporat de enzima TdT.
popularitatea relativă a colorării tunelului/metodelor de testare a tunelului
un sondaj realizat pe 50 de lucrări de cercetare publicate în 2017 care conține termenul „test de TUNEL” sau „colorare de TUNEL”, a arătat că:
– 50% din hârtii utilizate dUTP conjugat direct cu FITC
– 15% utilizate biotină-dutp și streptavidină-HRP
– 15% utilizate FITC-dUTP și un anticorp anti-FITC conjugat cu HRP
– 12% utilizate digoxigenină-dUTP și un anticorp anti-digoxigenină conjugat fie cu un colorant fluorescent, fie cu HRP
– 8% au folosit br-dutp și un anticorp anti-brdu conjugat cu un colorant fluorescent
toate lucrările chestionate au folosit testul tunel în Imagistică, mai degrabă decât în citometria în flux. În cazul în care a fost utilizat HRP, substratul DAB a fost adăugat pentru a crea o pată maro. Mai mult de 90% din lucrările de cercetare au folosit un kit pentru colorarea tunelului.