Giemsa Stain-principiu, procedură, rezultate, interpretare

BY admin
|
Biologie videoclipuri educaționale

actualizat ultima dată pe 5 februarie 2020 de Sagar Aryal

Introducere

Giemsa stain a fost un nume adoptat de la un om de știință chimist din Germania, pentru aplicarea unei combinații de reactivi în demonstrarea prezenței paraziților în malarie.

aparține unui grup de pete cunoscute sub numele de pete Romanowsky. Acestea sunt pete neutre formate dintr-un amestec de albastru de metilen oxidat, Azur și eozină Y și au efectuat pe un diapozitiv uscat la aer care este post-fixat cu metanol. Petele Romanowsky sunt aplicate în diferențierea celulelor, examinările patologice ale probelor precum filmele de sânge și măduvă osoasă și demonstrarea paraziților, de exemplu malarie. Există patru tipuri de pete Romanoswsky:

  • Giemsa stain
  • Jenner Stain
  • Wright stain
  • May-Grunwald Stain
  • Leishman stain

obiectivele Giemsa stain

  • pentru a pregăti cu exactitate soluția stoc de pete Giemsa
  • pentru a pata și identifica celulele sanguine
  • pentru a diferenția nucleele celulelor sanguine de citoplasmă

principiu

pata Giemsa este o tehnică de colorare standard de aur care este utilizată atât pentru frotiurile subțiri, cât și pentru cele groase pentru a examina sângele pentru paraziții malariei, un control de rutină pentru sânge și pentru a diferenția morfologic nucleara și citoplasma eritrocitelor, leucocitelor și trombocitelor și paraziților.

ca orice tip de pete Romanowsky, a compus atât coloranții acizi, cât și cei bazici, în raport cu afinitățile acidității și bazicității pentru celulele sanguine. Azur și albastru de metilen, un colorant bazic se leagă de nucleul acid care produce culoarea albastru-violet. Eozina este un colorant acid care este atras de citoplasmă și de granulele citoplasmatice care produc culoare roșie alcalină. Pata trebuie tamponată cu apă la pH 6,8 sau 7.2, pentru a precipita coloranții pentru a lega materiale simple.

în mod clasic, pata Giemsa este o pată diferențială care este alcătuită dintr-o combinație de reactivi (azur, albastru de metilen și colorant eozin) utilizate pe scară largă în citogenetică și histopatologie pentru diagnosticul:

  1. malarie, spirochete și alți paraziți ai sângelui
  2. Chlamydia trachomatis corpuri de incluziune
  3. Borrelia spp
  4. Yersinia pestis
  5. Histoplasma spp
  6. chisturi Pneumocystis jiroveci

reactivi utilizați

  • metanol
  • Giemsa pulbere
  • glicerina
  • apă (tampon)

procedura

prepararea soluției stoc de pete Giemsa (500ml)

  1. în 250 ml de metanol, se adaugă 3,8 g de pulbere Giemsa și se dizolvă.
  2. încălziți soluția până la ~60oC
  3. apoi, adăugați 250 ml de glicerină în soluție, încet.
  4. filtrați soluția și lăsați-o să stea aproximativ 1-2 luni înainte de utilizare.

prepararea soluției de lucru

  1. adăugați 10 ml de soluție stoc la 80 ml de apă distilată și 10 ml de metanol

procedura de colorare 1: colorarea filmului subțire

  1. pe o lamă de sticlă microscopică uscată curată, faceți o peliculă subțire a specimenului (sânge) și lăsați să se usuce la aer.
  2. înmuiați frotiul (2-3 scufundări) în metanol pur pentru fixarea frotiului, lăsați să se usuce la aer timp de 30 de secunde
  3. inundați diapozitivul cu 5% soluție de pată Giemsa timp de 20-30 de minute.
  4. spălați cu apă de la robinet și lăsați să se usuce

notă: în caz de urgență, lăsați soluția de pată Giemsa timp de 5-10 minute

procedura de colorare 2: colorare cu Film gros

  1. adăugați un frotiu gros de sânge și uscați la aer timp de 1 oră pe un suport de colorare.
  2. înmuiați frotiul gros de sânge în pata Giemsa diluată (preparată prin administrarea a 1 ml de soluție stoc și adăugarea la 49 ml de tampon fosfat sau apă distilată, dar rezultatele pot varia diferit).
  3. spălați frotiul prin scufundare în apă tamponată cu apă distilată timp de 3-5 minute
  4. lăsați-l să se usuce

rezultate

citoplasma și granulele citoplasmatice ale celulelor sanguine apar de culoare roșie, în timp ce nucleul apare de culoare albastru-violet.

eritrocitele vor apărea roz în clour

  • eozinofilele vor avea un nucleu albastru-violet, o citoplasmă roz pal și granule roșii portocalii.
  • neutrofilele vor apărea nucleu roșu purpuriu și o citoplasmă roz.
  • bazofilele vor avea un nucleu violet și granule albăstrui.
  • limfocitele au un nucleu Albastru închis și o citoplasmă Albastru deschis.
  • monocitele vor avea un nucleu violet și o citoplasmă roz.
  • trombocitele vor avea granule purpurii.

Giemsa Stain-principiu, procedură, rezultate, interpretare

sursa imaginii: Wikipedia

interpretare

Azur și albastru de metilen, un colorant bazic se leagă de nucleul acid care produce culoarea albastru-violet. Eozina este un colorant acid care este atras de citoplasmă și de granulele citoplasmatice care produc o culoare roșu-portocalie alcalină.

Aplicații pata Giemsa

  1. pata Giemsa este specifică grupărilor fosfat ale ADN-ului. Se atașează de regiuni ale ADN-ului cu cantități mari de legare adenină-timină.
  2. pata Giemsa este utilizată în banda Giemsa (bandă G), pentru a pata cromozomii și este adesea folosită pentru a crea o reprezentare schematică a cromozomilor (idiogramă).
  3. fiind o pată diferențială, pata Giemsa poate fi utilizată pentru a studia aderența bacteriilor patogene la celulele umane, diferențiind celulele umane ca celule violete și bacteriene ca roz.
  4. poate fi utilizat pentru diagnosticul histopatologic al malariei și al unor paraziți de sânge spirochete și protozoare.
  5. este, de asemenea, utilizat în pata de țesut Wolbach I.e colorarea țesutului hematopoietic și pentru identificarea bacteriilor și rickettsia
  6. pata Giemsa este o pată clasică de film de sânge pentru frotiuri de sânge periferic și specimene de măduvă osoasă. Celulele roșii din sânge se colorează roz, trombocitele se colorează roz deschis, citoplasma limfocitelor se colorează Albastru deschis, citoplasma monocitelor se colorează albastru pal și cromatina nucleară a leucocitelor se colorează magenta.
  7. pata Giemsa este, de asemenea, utilizată pentru vizualizarea cromozomilor, identificarea anomaliilor cromozomiale precum translocarea și rearanjarea,
  8. Giemsa pătează Histoplasma fungică, bacteriile Chlamydia și poate fi utilizată pentru identificarea mastocitelor.

avantaje

  • ușor disponibile, ușor de preparat, întreținut și utilizat

limitări

  • pata Giemsa de lucru trebuie pregătită cu puțin timp înainte de utilizare.
  1. tehnici de colorare: Giemsa de Kathleen P Freeman, Karen l Gerber:Vetstream
  2. Paramedic lume; Practica hematologiei / tehnica de colorare Giemsa
  3. cum funcționează petele Romanowsky și de ce rămân valoroase – inclusiv un mecanism universal de colorare Romanowsky propus și o schemă rațională de depanare de către Horobin RW. / ncbi.nlm.nih. Gov

surse de Internet

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK