Northern blot

un northernblot este o metodă de laborator utilizată pentru a detecta molecule specifice de ARN printre amixtura de ARN. Northern blotting poate fi utilizat pentru a analiza un eșantion de ARN din țesut aparticular sau tip de celulă pentru a măsura expresia ARN a genelorparticulare. Această metodă a fost numită pentru similitudinea sa cu tehnicacunoscută ca o pată de Sud.

primul pas într-o pată nordică este de a denatura sau separa ARN-ul din eșantion în fire unice, ceea ce asigură că firele sunt desfăcute și că nu există nicio legătură între fire. Moleculele de ARN sunt apoi separateîn funcție de dimensiunile lor folosind o metodă numită electroforeză în gel. Următorulsepararea, ARN-ul este transferat din gel pe o membrană blotting.(Deși acest pas este ceea ce conferă tehnicii numele de „Northern blotting”, termenul este de obicei folosit pentru a descrie întreaga procedură.) Odată ce transferul este complet, membrana blotting poartă toate benzile ARN inițial pe gel. Apoi, membrana este tratată cu o mică bucată de ADN sau ARN numităo sondă, care a fost proiectată să aibă o secvență complementară secvenței ARN aparticulare din probă; acest lucru permite sondei să hibridizeze, orbind, la un fragment specific de ARN de pe membrană. În plus, sonda are alabel, care este de obicei un atom radioactiv sau un colorant fluorescent. Astfel, după hibridizare, sonda permite moleculei de ARN de interes să fie detectată dintre numeroasele molecule de ARN diferite de pe membrană.