obiectiv

pentru a învăța tehnica aglutinării latexului.

aglutinarea latexului se observă atunci când o probă care conține antigenul (sau anticorpul) specific este amestecată cu un anticorp (sau antigen) care este acoperit pe suprafața particulelor de latex.

testele de aglutinare a latexului au fost aplicate în laboratoarele clinice pentru detectarea bolilor infecțioase, iar în 1956 Singer și Plotz au descris pentru prima dată testul factorului reumatoid, un test bazat pe aglutinarea latexului. În artrita reumatoidă (RA), anticorpii IgG produși de limfocite în articulația sinovială reacționează cu anticorpii IgM (RF, factorul reumatoid) pentru a genera complexe imune care activează complementul și provoacă distrugerea țesutului. RA are o semnificație diagnostică.

de atunci, testele pentru detectarea infecțiilor microbiene și virale, a bolilor autoimune, a hormonilor, a medicamentelor și a proteinelor serice au fost dezvoltate și comercializate de multe companii din întreaga lume. Principiul este utilizat pentru diagnosticarea multor infecții, cum ar fi hepatita B, H. influenzae, N. meningitidis etc.. Toate metodele de detectare sau cuantificare a antigenului sau anticorpului profită de faptul că reacționează pentru a forma un complex. La concentrația optimă antigen-anticorp, acest complex precipită. Cu toate acestea, dacă antigenul este de natură sub formă de particule, se observă aglutinarea complexului antigen-anticorp.

reacții de aglutinare

reacția dintre un antigen de particule și un anticorp are ca rezultat o aglomerare vizibilă numită aglutinare. Anticorpii care produc astfel de reacții sunt cunoscuți sub numele de aglutinine. Principiul reacțiilor de aglutinare este similar cu reacțiile de precipitare; ele depind de legarea încrucișată a antigenelor polivalente. Când antigenul este un eritrocit, se numește hemaglutinare.Teoretic, toți anticorpii pot aglutina antigene de particule, dar IgM, datorită specificității sale ridicate, este o aglutinină deosebit de bună.

nu există nici o aglutinare poate fi observată atunci când concentrația de anticorp este mare, (diluții mai mici), iar apoi proba este diluată, are loc aglutinarea. Efectul Prozone este definit ca invizibilitatea aglutinării la concentrații mari de anticorpi. Aceasta se datorează faptului că excesul de anticorpi formează complexe foarte mici care nu se aglomerează pentru a forma aglutinare vizibilă.

test calitativ de aglutinare

testele de aglutinare pot fi utilizate într-o manieră calitativă pentru a analiza prezența unui antigen sau a unui anticorp. Anticorpul este amestecat cu antigenul de particule și un test pozitiv este indicat prin aglutinarea antigenului de particule.

de exemplu, pentru a determina tipul de sânge al pacientului, celulele roșii din sânge ale persoanei pot fi amestecate cu anticorpi la un antigen al grupului sanguin. Un alt exemplu este că pentru a testa prezența anticorpilor într-o probă de pacient, serul pacientului este amestecat cu globulele roșii (RBC) ale unui tip de sânge cunoscut.

test cantitativ de aglutinare

pentru a măsura nivelul anticorpilor la antigene de particule, testul de aglutinare poate fi utilizat pe scară largă. Pentru acest test, se pot face diluții seriale ale probei și se testează anticorpi. Apoi se poate adăuga o cantitate fixă de antigen de particule sau bacterii sau celule roșii din sânge. Determinați diluția maximă care formează aglutinarea și această diluție maximă care dă aglutinare observabilă este cunoscută sub numele de titru. Rezultatele sunt prezentate ca reciproca diluției maxime care formează aglutinarea vizibilă.

hemaglutinare pasivă

sensibilitatea și simplitatea reacțiilor de aglutinare pot fi extinse la antigene solubile prin tehnica aglutinării pasive a hemei. În această tehnică, celulele roșii din sânge acoperite cu antigen sunt preparate prin amestecarea unui antigen solubil cu celule roșii din sânge care au fost tratate cu acid tanic sau clorură de crom, ambele promovând adsorbția antigenului la suprafața celulelor. Cu toate acestea, este posibil să se acopere eritrocitele cu un antigen solubil (de ex.. antigen viral, o polizaharidă sau un hapten) și utilizați globulele roșii acoperite într-un test de aglutinare pentru anticorpi la antigenul solubil.

serul diluat în serie care conține anticorpi este încărcat în fiecare godeu al plăcii microtitrului, după ce globulele roșii acoperite cu antigen sunt aplicate în fiecare godeu. Modelul caracteristic al globulelor roșii aglutinate pe godeuri este utilizat ca instrument pentru testarea reacțiilor de aglutinare. Dacă antigenul este sub formă de particule, atunci antigenul poate reacționa cu anticorpul din ser și are ca rezultat aglomerarea antigenului care prezintă un rezultat pozitiv.

în ultimii ani, a existat o schimbare de la celulele roșii din sânge la particule sintetice, cum ar fi margele de latex. Preparatul poate fi utilizat imediat sau depozitat pentru utilizare ulterioară. Utilizarea margelelor sintetice oferă avantajele consistenței, uniformității și stabilității. Mai mult, reacțiile de aglutinare care utilizează margele sintetice pot fi citite rapid, adesea în decurs de 3 până la 5 minute de la amestecarea mărgelelor cu proba de testare. Indiferent dacă se bazează pe globule roșii sau pe margele sintetice mai convenabile și versatile, reacțiile de aglutinare sunt simple de realizat, nu necesită echipamente scumpe și detectează o cantitate mică de anticorpi ( concentrații de până la nanograme pe mililitru).

etapa inițială a testului este legarea împreună a particulei de latex de moleculele de anticorpi care se atașează în mod specific la determinanții antigenici de pe suprafața particulelor. Există o formare de rețele mari prin aceste legături încrucișate și aceste rețele mari se sedimentează ușor datorită dimensiunii mari a aglomerărilor și sunt vizibile cu ochiul liber în câteva minute. Gradul de aglutinare poate fi determinat prin trasarea concentrației de agutinant care dă o curbă în formă de clopot. Complexele antigen-anticorp pot fi mărite folosind particulele de latex. Multe dintre testele de aglutinare a latexului sunt efectuate manual și detectate prin observare vizuală. Pentru a determina aglutinarea trebuie să conțină aproximativ 100 de aglomerări, iar aceste aglomerări trebuie să aibă o dimensiune de aproximativ 50 micrometri pentru a fi văzute cu ochii.

reacții de inhibare a aglutinării

dacă anticorpul este incubat cu antigen înainte de amestecarea cu latex, aglutinarea este inhibată; acest lucru se datorează faptului că anticorpii liberi nu sunt disponibili pentru aglutinare. În inhibarea aglutinării, absența aglutinării este diagnosticarea antigenului, asigură un test sensibil ridicat pentru cantități mici de antigen. De exemplu, kiturile de sarcină la domiciliu conțin particule de latex acoperite cu gonadotropină corionică umană (hormon HCG) și anticorpi la HCG. O femeie gravidă urină conțin HCG, care este secretat de placenta în curs de dezvoltare după fertilizare. Adăugarea de urină care conține HCG inhibă aglutinarea particulelor de latex atunci când se adaugă anticorpul anti-HCG; și astfel sarcina este indicată de absența aglutinării.

particulele de Latex

polimerizarea emulsiei este procedura care se aplică pentru prepararea particulelor de latex. În primul rând, stirenul este amestecat cu soluția de surfactant (dodecil sulfat de sodiu), formează miliarde de Miceli emulsionați care au un diametru uniform. Apoi se adaugă o cantitate mică de persulfat de potasiu, care este un inițiator de polimerizare solubil în apă. Când procesul de polimerizare este terminat, lanțurile de polistiren sunt aranjate în micele. Partea hidrocarbonată a lanțului de polistiren este atașată la centru și ionul sulfat terminal la suprafața sferelor care este expusă fazei de apă. Alte hidrocarburi și derivații săi sunt, de asemenea, utilizați pentru producerea particulelor uniforme de latex, unele dintre exemple fiind striren-dlvinilbenzen, Polimetil metacrilat, stiren vinil toluen, polivinil toluen etc.

procesul de producere a particulelor de latex este evoluat din producția de cauciuc sintetic și, de asemenea, emulsia are un aspect lăptos, termenul de latex îi este dat .Diametrul dorit al particulei de latex poate fi realizat prin modificarea procesului de preparare, hidrocarburilor, surfactanților și inițiatorului. Dimensiunea particulelor de latexuri sunt, de obicei variază între 0,05 la 2 la 2 MMCT. Datorită prezenței ionilor de sulfat și sulfonat pe suprafața particulei, care asigură o sarcină inerentă negativă a suprafeței particulei.

particulele de latex pot fi funcționalizate și tratate la suprafață pentru a facilita stabilitatea legării și pentru a crește atașarea analitului. Tratamentele funcționale precum amidarea, aminarea, carboxilarea, hidroxilarea și chiar magnetizarea sunt utilizate pentru a crește proprietățile particulelor de latex. De asemenea, diferite culori ale particulelor de latex sunt disponibile comercial, care facilitează citirea vizuală.

testul de aglutinare a latexului este o metodă clinică pentru detectarea anumitor antigeni sau anticorpi într-o varietate de fluide corporale, cum ar fi sângele, saliva, urina sau lichidul cefalorahidian. Proba care urmează să fie testată este trimisă la laborator și unde este amestecată cu margele de latex acoperite cu un antigen sau anticorp specific. Aglomerarea margelelor de latex (aglutinare) indică prezența particulelor suspectate.

testul de aglutinare a latexului include unele dintre avantaje .Acestea sunt,

1. Abilitatea de a obține rezultate semi-cantitative.
2. Un cost redus de testare individuală.
3. Timp relativ scurt pentru a obține rezultate.

prin efectuarea de diluții de 2 până la 10 ori a probelor se pot obține rezultatele semicantitative .Test de aglutinare Latex au unele dezavantaje, de asemenea, care includ

1.Trebuie să interpreteze cu atenție rezultatele marginale și
2. Probleme cu specificitate datorate substanțelor interferente în multe teste.