Giemsa Stain-princip, procedur, resultat, Tolkning

BY admin
|
biologiska pedagogiska videor

Senast uppdaterad den 5 februari 2020 av Sagar Aryal

introduktion

Giemsa stain var ett namn som antogs från en tysk Kemistforskare, för hans tillämpning av en kombination av reagenser för att demonstrera närvaron av parasiter i malaria.

det tillhör en grupp fläckar som kallas Romanowsky-fläckar. Dessa är neutrala fläckar som består av en blandning av oxiderad metylenblå, azurblå och Eosin Y och de utförs på en lufttorkad glid som är efterfixerad med metanol. Romanowsky fläckar appliceras i differentieringen av celler, patologiska undersökningar av prover som blod-och benmärgsfilmer och demonstration av parasiter t.ex.malaria. Det finns fyra typer av Romanoswsky fläckar:

  • Giemsa fläck
  • Jenner fläck
  • Wright fläck
  • maj-Grunwald fläck
  • Leishman fläck

mål för Giemsa fläck

  • för att noggrant förbereda Giemsa-fläckbeståndslösningen
  • för att fläcka och identifiera blodkroppar
  • för att differentiera blodcellskärnor från cytoplasman

princip

Giemsa stain är en guldstandardfärgningsteknik som används för både tunna och tjocka utstryk för att undersöka blod för malariaparasiter, en rutinkontroll för andra blodparasiter och morfologiskt differentiera kärn-och cytoplasma av erytrocyter, leukocyter och blodplättar och parasiter.

liksom alla typer av Romanowsky-fläckar består den av både sura och basiska färgämnen, i förhållande till affiniteter av surhet och basicitet för blodceller. Azurblå och metylenblå, ett grundläggande färgämne binder till syrakärnan som producerar blå-lila färg. Eosin är ett surt färgämne som lockas till cytoplasman och cytoplasmatiska granuler som är alkalisk-producerande röd färg. Fläcken måste buffras med vatten till pH 6,8 eller 7.2, för att fälla ut färgämnena för att binda enkla material.

Klassiskt är Giemsa-fläck en differentiell fläck som består av en kombination av reagens (azurblå, metylenblå och eosinfärg) som används i stor utsträckning inom cytogenetik och histopatologi för diagnos av:

  1. Malaria, spiroketer och andra blodparasiter
  2. Chlamydia trachomatis inklusionskroppar
  3. Borrelia spp
  4. Yersinia pestis
  5. Histoplasma spp
  6. Pneumocystis jiroveci cystor

använda reagenser

  • metanol
  • Giemsa pulver
  • Glycerin
  • vatten (buffert)

förfarande

beredning av Giemsa – Fläckbeståndslösningen (500 ml)

  1. i 250 ml metanol tillsätt 3,8 g Giemsa-pulver och lös upp.
  2. värm lösningen upp till ~60oC
  3. tillsätt sedan 250 ml glycerin till lösningen långsamt.
  4. filtrera lösningen och låt den stå i ca 1-2 månader före användning.

beredning av arbetslösning

  1. tillsätt 10 ml stamlösning till 80 ml destillerat vatten och 10 ml metanol

färgningsprocedur 1: Tunnfilmfärgning

  1. på en ren, torr mikroskopisk Glasskiva, gör en tunn film av provet (blod) och låt lufttorka.
  2. doppa smeten (2-3 dips) i ren metanol för fixering av smeten, låt lufttorka i 30sekunder
  3. översväm bilden med 5% Giemsa fläcklösning i 20-30 minuter.
  4. spola med kranvatten och låt torka

OBS: vid nödsituationer, lämna Giemsa-fläcklösningen i 5-10 minuter

färgningsprocedur 2: Tjockfilmfärgning

  1. tillsätt ett tjockt blodutstryk och lufttorka i 1 timme på ett färgställ.
  2. doppa det tjocka blodutstryket i utspädd Giemsa-fläck (beredd genom att ta 1 ml av stamlösningen och tillsätta till 49 ml fosfatbuffert eller destillerat vatten, men resultaten kan variera olika).
  3. tvätta smeten genom att doppa in i buffrat vatten av destillerat vatten i 3-5 minuter
  4. låt det torka

resultat

cytoplasman och cytoplasmatiska granuler av blodceller verkar röda i färg medan kärnan verkar blålila i färg.

erytrocyterna kommer att visas rosa i clour

  • eosinofiler kommer att ha en blå-lila kärna, en blekrosa cytoplasma och orange-röda granuler.
  • neutrofiler kommer att visas lila-röd kärna och en rosa cytoplasma.
  • basofiler kommer att ha en lila kärna och blåaktiga granuler.
  • lymfocyter har en mörkblå kärna och en ljusblå cytoplasma.
  • monocyter kommer att ha en lila kärna och en rosa cytoplasma.
  • blodplättar kommer att ha lila granuler.

Giemsa Stain-princip, procedur, resultat, Tolkning

Bildkälla: Wikipedia

Tolkning

azurblå och metylenblå, ett basfärgämne binder till syrakärnan som producerar blå-lila färg. Eosin är ett surt färgämne som lockas till cytoplasman och cytoplasmatiska granuler som är alkaliska producerande röd-orange färg.

applikationer Giemsa stain

  1. Giemsa stain är specifik för fosfatgrupperna i DNA. Det fäster sig till regioner av DNA med höga mängder adenin-tyminbindning.
  2. Giemsa fläck används i Giemsa banding (G-banding), för att fläcka kromosomer och det används ofta för att skapa en schematisk representation av kromosomer (idiogram).
  3. som en differentiell fläck kan Giemsa-fläck användas för att studera vidhäftningen av patogena bakterier till mänskliga celler, differentiera mänskliga celler som lila och bakterieceller som rosa.
  4. det kan användas för histopatologisk diagnos av malaria och vissa spirochete och protozoan blodparasiter.
  5. det används också i Wolbachs vävnadsfläck i.e färgning av hematopoietisk vävnad och för identifiering av bakterier och rickettsia
  6. Giemsa-fläck är en klassisk blodfilmfläck för perifera blodutstryk och benmärgsprover. Röda blodkroppar fläckar rosa, blodplättar fläckar en ljus blekrosa, lymfocytcytoplasmfläckar himmelblå, monocytcytoplasmfläckar ljusblå och leukocytkärnkromatinfläckar magenta.
  7. Giemsa-fläck används också för att visualisera kromosomer, identifiera kromosomala anomalier som translokation och omarrangemang,
  8. Giemsa fläckar svamphistoplasma, Klamydiabakterier och kan användas för att identifiera mastceller.

fördelar

  • lätt tillgänglig, lätt att förbereda, underhålla och använda

begränsningar

  • arbetande Giemsa-fläck måste beredas strax före användning.
  1. färgningstekniker: Giemsa av Kathleen p Freeman, Karen L Gerber: Vetstream
  2. paramedicinsk Värld; Hematology Practicals / Giemsa-färgningsteknik
  3. hur Romanowsky-fläckar fungerar och varför de förblir värdefulla-inklusive en föreslagen universell Romanowsky-färgningsmekanism och ett rationellt Felsökningsschema av Horobin RW. / ncbi.nlm.nih. gov

internetkällor

  • 13% – https://en.wikipedia.org/wiki/Giemsa_stain
  • 3% – http://pathonet.com/pathonet/education-stainings
  • 1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC540181/
  • 1% – https://clinicalgate.com/preparation-and-staining-methods-for-blood-and-bone-marrow-films/
  • <1% – https://www.researchgate.net/publication/24346194_Histopathology_for_the_diagnosis_of_infectious_diseases
  • <1% – https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1453983/
  • <1% – https://chlorine.americanchemistry.com/Science-Center/Chlorine-Compound-of-the-Month-Library/Methylene-Blue-Part-2-The-Chemists-Indicator/
  • <1% – https://answers.yahoo.com/question/index?qid=20080712002122AAAhrqK