Hybridomteknik
användningen av monoklonala antikroppar är många och inkluderar förebyggande, diagnos och behandling av sjukdom. Till exempel kan monoklonala antikroppar skilja delmängder av B-celler och T-celler, vilket är till hjälp för att identifiera olika typer av leukemier. Dessutom har specifika monoklonala antikroppar använts för att definiera cellytmarkörer på vita blodkroppar och andra celltyper. Detta ledde till klustret av differentieringsserier av markörer. Dessa kallas ofta för CD-markörer och definierar flera hundra olika cellytekomponenter i celler, var och en specificerad genom bindning av en viss monoklonal antikropp. Sådana antikroppar är extremt användbara för fluorescensaktiverad cellsortering, den specifika isoleringen av vissa typer av celler.
i diagnostisk histopatologiedit
med hjälp av monoklonala antikroppar kan vävnader och organ klassificeras baserat på deras uttryck av vissa definierade markörer, som återspeglar vävnad eller cellulär genesis. Prostataspecifikt antigen, alkaliskt fosfatas i placenta, humant koriongonadotropin, XX-fetoprotein och andra är organassocierade antigener och produktionen av monoklonala antikroppar mot dessa antigener hjälper till att bestämma arten av en primär tumör.
monoklonala antikroppar är särskilt användbara för att skilja morfologiskt liknande lesioner, som pleural och peritoneal mesoteliom, adenokarcinom och vid bestämning av organ-eller vävnadsursprung för odifferentierade metastaser. Valda monoklonala antikroppar hjälper till att upptäcka ockulta metastaser (cancer av okänt primärt ursprung) genom immuncytologisk analys av benmärg, andra vävnadsspirat, liksom lymfkörtlar och andra vävnader och kan ha ökad känslighet över normal histopatologisk färgning.
en studie utförde en känslig immunhistokemisk analys på benmärgsaspirat av 20 patienter med lokaliserad prostatacancer. Tre monoklonala antikroppar (T16, C26 och AE-1), som kan känna igen membran-och cytoskeletala antigener uttryckta av epitelceller för att detektera tumörceller, användes i analysen. Benmärgsaspirat hos 22% av patienterna med lokaliserad prostatacancer (steg B, 0/5; steg C, 2/4) och 36% patienter med metastatisk prostatacancer (steg D1, 0/7 patienter; steg D2, 4/4 patienter) hade antigenpositiva celler i benmärgen. Det drogs slutsatsen att immunhistokemisk färgning av benmärgsaspirat är mycket användbar för att detektera ockulta benmärgsmetastaser hos patienter med uppenbarligen lokaliserad prostatacancer.
även om immuncytokemi med användning av tumörassocierade monoklonala antikroppar har lett till en förbättrad förmåga att detektera ockulta bröstcancerceller i benmärgsaspirat och perifert blod, är vidareutveckling av denna metod nödvändig innan den kan användas rutinmässigt. En stor nackdel med immuncytokemi är att endast tumörassocierade och inte tumörspecifika monoklonala antikroppar används, och som ett resultat kan viss korsreaktion med normala celler uppstå.
för att effektivt arrangera bröstcancer och bedöma effekten av rensningsregimer före autolog stamcellsinfusion är det viktigt att upptäcka även små mängder bröstcancerceller. Immunhistokemiska metoder är idealiska för detta ändamål eftersom de är enkla, känsliga och ganska specifika. Franklin et al. utförde en känslig immuncytokemisk analys genom att använda en kombination av fyra monoklonala antikroppar (260f9, 520c9, 317g5 och BrE-3) mot tumörcellsytglykoproteiner för att identifiera brösttumörceller i benmärg och perifert blod. De drog slutsatsen från resultaten att immuncytokemisk färgning av benmärg och perifert blod är ett känsligt och enkelt sätt att upptäcka och kvantifiera bröstcancerceller.
en av huvudorsakerna till metastatisk återfall hos patienter med solida tumörer är tidig spridning av maligna celler. Användningen av monoklonala antikroppar (mAbs) specifika för cytokeratiner kan identifiera disseminerade individuella epiteltumörceller i benmärgen.
en studie rapporterar om att ha utvecklat ett immuncytokemiskt förfarande för samtidig märkning av cytokeratinkomponent nr 18 (CK18) och prostataspecifikt antigen (PSA). Detta skulle hjälpa till vid vidare karakterisering av spridda individuella epiteltumörceller hos patienter med prostatacancer. De tolv kontrollaspiraterna från patienter med godartad prostatahypertrofi visade negativ färgning, vilket ytterligare stöder specificiteten hos CK18 vid detektering av epiteltumörceller i benmärg.
i de flesta fall av malign sjukdom komplicerad av effusion kan neoplastiska celler lätt identifieras. Men i vissa fall är maligna celler inte så lätt att se eller deras närvaro är för tveksamt att kalla det en positiv rapport. Användningen av immuncytokemiska tekniker ökar diagnostisk noggrannhet i dessa fall.
Ghosh, Mason och Spriggs analyserade 53 prover av pleural eller peritoneal vätska från 41 patienter med malign sjukdom. Konventionell cytologisk undersökning hade inte avslöjat några neoplastiska celler. Tre monoklonala antikroppar (anti-CEA, Ca 1 och HMFG-2) användes för att söka efter maligna celler. Immunocytokemisk märkning utfördes på ofärgade utstryk, som hade lagrats vid -20 kcal C upp till 18 månader. Tolv av de fyrtio fallen där immuncytokemisk färgning utfördes avslöjade maligna celler. Resultatet representerade en ökning av diagnostisk noggrannhet på cirka 20%. Studien drog slutsatsen att hos patienter med misstänkt malign sjukdom bör immuncytokemisk märkning användas rutinmässigt vid undersökning av cytologiskt negativa prover och har viktiga konsekvenser med avseende på patienthantering.
en annan tillämpning av immuncytokemisk färgning är för detektering av två antigener i samma smet. Dubbelfärgning med lätta kedjeantikroppar och med T-och B-cellmarkörer kan indikera neoplastiskt ursprung för ett lymfom.
en studie har rapporterat isoleringen av en hybridomcellinje (klon 1e10), som producerar en monoklonal antikropp (IgM, k-isotyp). Denna monoklonala antikropp visar specifik immuncytokemisk färgning av nukleoler.
vävnader och tumörer kan klassificeras baserat på deras uttryck av vissa markörer, med hjälp av monoklonala antikroppar. De hjälper till att skilja morfologiskt liknande lesioner och vid bestämning av organ-eller vävnadsursprunget för odifferentierade metastaser. Immuncytologisk analys av benmärg, vävnadsspirat, lymfkörtlar etc. med utvalda monoklonala antikroppar hjälper till att upptäcka ockulta metastaser. Monoklonala antikroppar ökar känsligheten vid detektering av även små mängder invasiva eller metastatiska celler. Monoklonala antikroppar (mAbs) specifika för cytokeratiner kan detektera disseminerade enskilda epiteltumörceller i benmärgen.