mål

för att lära sig tekniken för latex agglutination.

latexagglutination observeras när ett prov som innehåller det specifika antigenet (eller antikroppen) blandas med en antikropp (eller antigen) som är belagd på ytan av latexpartiklar.

Latexagglutinationstest har tillämpats i kliniska laboratorier för detektering av infektionssjukdomar och 1956 beskrev Singer och Plotz först Reumatoidfaktortest, ett test baserat på latexagglutination. Vid reumatoid artrit (RA) reagerar IgG-antikroppar som produceras av lymfocyter i synovialleden med IgM-antikropparna (RF, reumatoid faktor) för att generera immunkomplex som aktiverar komplementet och orsakar vävnadsförstöring. RA är av diagnostisk betydelse.

sedan dess har tester för att upptäcka mikrobiella och virala infektioner, autoimmuna sjukdomar, Hormoner, Läkemedel och serumproteiner utvecklats och marknadsförts av många företag över hela världen. Principen används för att diagnostisera många infektioner som hepatit B, H. influenzae, N. meningitidis, etc.. Alla metoder för att detektera eller kvantifiera antigen eller antikropp utnyttjar det faktum att de reagerar för att bilda ett komplex. Vid den optimala antigen-antikroppskoncentrationen faller detta komplex ut. Om antigenet är partikelformigt i naturen observeras agglutination av antigen-antikroppskomplex.

Agglutinationsreaktioner

reaktionen mellan ett partikelformigt antigen och en antikropp resulterar i synlig klumpning som kallas agglutination. Antikroppar som producerar sådana reaktioner kallas agglutininer. Principen för Agglutinationsreaktioner liknar utfällningsreaktioner; de beror på tvärbindningen av polyvalenta antigener. När antigenet är en erytrocyt kallas det hemagglutination.Teoretiskt kan alla antikroppar agglutinera partikelformiga antigener men IgM, på grund av dess höga specificitet är ett särskilt bra agglutinin.

det finns ingen agglutination kan observeras när koncentrationen av antikropp är hög, (lägre utspädningar), och sedan späds provet, agglutination inträffar. Prozone-effekten definieras som osynligheten av agglutination vid höga koncentrationer av antikroppar. Det beror på att överskott av antikropp bildar mycket små komplex som inte klumpar sig för att bilda synlig agglutination.

kvalitativt agglutinationstest

Agglutinationstest kan användas på ett kvalitativt sätt för att analysera närvaron av ett antigen eller en antikropp. Antikroppen blandas med partikelantigenet och ett positivt test indikeras genom agglutinering av partikelantigenet.

till exempel, för att bestämma patientens blodtyp kan de röda blodkropparna hos personen blandas med antikropp mot ett blodgruppsantigen. Ett annat exempel är att för att analysera närvaron av antikroppar i ett patientprov blandas patientens serum med den röda blodkroppen (RBC) av en känd blodtyp.

kvantitativt agglutinationstest

för att mäta nivån av antikroppar mot partikelformiga antigener kan agglutinationstest användas i stor utsträckning. För detta test kan seriella utspädningar av provet göras och det testas för antikropp. Sedan kan en fast mängd partikelantigen eller bakterier eller röda blodkroppar tillsättas till den. Bestäm den maximala utspädning som bildar agglutination och denna maximala utspädning som ger observerbar agglutination kallas titer. Resultaten visas som det ömsesidiga av den maximala utspädningen som bildar synlig agglutination.

passiv Hemagglutination

känsligheten och enkelheten hos agglutinationsreaktioner kan utvidgas till lösliga antigener med tekniken för passiv hemagglutination. I denna teknik framställs antigenbelagda röda blodkroppar genom att blanda ett lösligt antigen med röda blodkroppar som har behandlats med garvsyra eller kromklorid, vilka båda främjar adsorption av antigen till ytan av cellerna. Det är emellertid möjligt att belägga erytrocyter med ett lösligt antigen (t. ex.. viral antigen, en polysackarid eller en hapten) och använd de belagda röda blodkropparna i ett agglutinationstest för antikropp mot det lösliga antigenet.

seriellt utspätt serum som innehåller antikropp laddas till varje brunn i mikrotiterplattan, efter att antigenbelagda röda blodkroppar appliceras på varje brunn. Det karakteristiska mönstret av agglutinerade röda blodkroppar på brunnarna används som ett verktyg för att analysera agglutinationsreaktionerna. Om antigenet är partikelformigt kan antigenet reagera med antikroppen i serum och resulterar i klumpning av antigen som visar ett positivt resultat.

under de senaste åren har det skett en övergång från röda blodkroppar till syntetiska partiklar, såsom latexpärlor. Preparatet kan antingen användas omedelbart eller lagras för senare användning. Användningen av syntetiska pärlor erbjuder fördelarna med konsistens, enhetlighet och stabilitet. Dessutom kan agglutineringsreaktioner som använder syntetiska pärlor läsas snabbt, ofta inom 3 till 5 minuter efter blandning av pärlorna med testprovet. Oavsett om det är baserat på röda blodkroppar eller de mer praktiska och mångsidiga syntetiska pärlorna, är agglutineringsreaktioner enkla att utföra, kräver inte dyr utrustning och upptäcker liten mängd antikropp ( koncentrationer så låga som nanogram per milliliter).

det första steget i testet är kopplingen av latexpartikeln av antikroppsmolekylerna som specifikt fäster vid de antigena determinanterna på partiklarnas yta. Det finns en bildning av stora gitter genom dessa tvärbindningar och dessa stora gitter sediment lätt på grund av den stora storleken på klumpar och är synliga för blotta ögat inom några minuter. Graden av agglutination kan bestämmas genom att plotta aggutinantkoncentrationen som ger en klockformad kurva. Antigen-antikroppskomplexen kan förstoras med användning av latexpartiklarna. Många av latexagglutinationstesterna utförs manuellt och detekteras genom visuell observation. För att bestämma agglutination måste det innehålla cirka 100 klumpar, och dessa klumpar måste vara av cirka 50 mikrometer i storlek för att ses av ögat.

Agglutinationshämningsreaktioner

om antikroppen inkuberas med antigen före blandning med latex hämmas agglutination; detta beror på att fria antikroppar inte är tillgängliga för agglutination. Vid agglutinationshämning är frånvaron av agglutination diagnostisk av antigen, ger en högkänslig analys för små mängder antigen. Till exempel hem graviditet kit innehåller humant koriongonadotropin (HCG hormon) belagd latexpartikel och antikropp mot HCG. En gravid kvinna urin innehåller HCG som utsöndras av den utvecklande placentan efter befruktning. Tillsatsen av urin innehållande HCG hämmar agglutination av latexpartiklar när anti-HCG-antikroppen tillsätts; och sålunda indikeras graviditeten genom frånvaro av agglutination.

Latexpartiklarna

emulsionspolymerisation är det förfarande som appliceras för framställning av latexpartiklar. För det första styren blandas med det ytaktiva medlet (natriumdodecylsulfat) lösning, bildar en miljard emulgerade miceller som är i likformig diameter. Sedan tillsätts en liten mängd kaliumpersulfat till den som är en vattenlöslig polymerisationsinitiator. När polymerisationsprocessen är klar är polystyrenkedjorna anordnade i micellerna. Kolvätedelen av polystyrenkedjan är fäst vid mitten och terminalsulfatjonen till sfärens yta som utsätts för vattenfasen. Andra kolväten och dess derivat används också för framställning av de enhetliga latexpartiklarna, några av exemplen är stryren-dlvinylbensen, polymetylmetakrylat, styrenvinyltoluen, polyvinyltoluen etc.

processen för latexpartikelproduktion utvecklas från syntetisk gummiproduktion och även emulsionen har ett mjölkigt utseende, termen latex ges till den .Den önskade diametern av latexpartikeln kan göras genom att modifiera processen för framställning, kolväten, ytaktiva ämnen och initiatorn. Partikelstorleken hos latexer är vanligtvis varierar mellan 0,05 oc-m till 2 oc-m. På grund av närvaron av sulfat-och sulfonatjoner på partikelns yta som ger en inneboende negativ ytladdning till partikeln.

latexpartiklarna kan funktionaliseras och ytbehandlas för att underlätta bindningsstabiliteten och för att öka analytfästet. Funktionella behandlingar såsom amidering, aminering, karboxylering, hydroxylering och jämn magnetisering används för att öka egenskaperna hos latexpartiklar. Också olika färger av latexpartiklar finns kommersiellt tillgängliga som underlättar den visuella avläsningen.

latexagglutinationstestet är en klinisk metod för att detektera vissa antigener eller antikroppar i en mängd olika kroppsvätskor såsom blod, saliv, urin eller cerebrospinalvätska. Provet som ska testas skickas till labbet och där det blandas med latexpärlor belagda med ett specifikt antigen eller antikropp. Klumpningen av latexpärlor (agglutination) indikerar närvaron av misstänkta partiklar.

Latex agglutination test innehåller några av fördelarna .De är,

1. Förmåga att erhålla semikvantitativa resultat.
2. En låg individuell testkostnad.
3. Relativt kort tid för att få resultat.

genom att utföra 2-till 10-faldiga utspädningar av prover kan vi få de semikvantitativa resultaten .Latex agglutinationstest har vissa nackdelar också som inkluderar

1.Behöver noggrant tolka marginella resultat och
2. Problem med specificitet på grund av störande ämnen i många analyser.